冻干人凝血因子ⅷ浓制剂制造及检定规程

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1、冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。1　制造1.1制造要求1.1.1　对血浆的要求1.1.1.1所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求，血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。在采集时应减少皮肤损伤，保持血流通畅，并与抗凝剂充分混合，用塑料袋采集。新鲜分离液体血浆或新鲜冰冻血浆

2、及冻结冷沉淀，均可用于生产。1.1.1.2分离后的血浆应保持无菌，并应及时冰冻保存。自采血到冻结一般在8小时内完成。液体血浆应在4±2℃贮放，贮放时间应不超过小时，最长不得超过12小时。冰冻血浆（-30℃以下）保存期不超过6个月。1.1.2　对制造工作室、设备及原材料的要求，与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3～1.1.4项要求相同。1.2　制造工艺1.2.1　采用低温乙醇法或冻融法制得冷沉淀，经抽提、吸附、精制，亦可采用经卫生部批准的其他工艺制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。1.2.2　分批同

3、一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤器和不同机柜冻干的制品分为亚批。1.2.3　稳定剂及防腐剂制品内允许加稳定剂，制品应不含防腐剂。1.2.4除菌过滤及分装本品应用微孔薄膜过滤，可直接分装无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及规格确定。1.2.5　半成品检定每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验。1.2.6　冻干除菌过滤分装的制品经外观检查后立即冻结，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。2。5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。1.3　规格每瓶含人凝血因子Ⅷ的效价可有50、100、20

4、0、300、400IU五种，制品的效价应标示在瓶签及包装上。2　成品检定2.1抽样每批制品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品分别抽样做无菌试验和水分测定。2.2　物理检查2.2.1　外观应为乳白色疏松体，无融化迹象。溶解后溶液澄清或轻微乳光，允许有微量细小蛋白颗粒。2.2.2　真空度以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。2.2.3　溶解时间从冰箱取出的制品应先平衡至25～37℃，然后按瓶签标示量加入适量30～37℃灭菌注射用水，使其每ml含4IU。制品应于30分钟内溶解。2.3　化学检定按《生物制品化学检定规程》

5、进行。2.3.1　水分水分含量应≤3%（g/g）。2.3.2pH值取2.2.3项下溶解在20±2℃测定，pH值应为6.8～7.6。2.3.3　钠离子测定取2.2.3　项下溶液测定，钠离子含量应≤160mmol/L。2.3.4枸橼酸离子测定取2.2.3项下溶液测定，如加枸橼酸钠作稳定剂，其枸橼酸离子含量应≤25mmol/L。2.4　效价测定取2.2.3项下溶液用一步或二步法（见附录）进行测定，每瓶所含人凝血因子Ⅷ的效价应不低于标示量的80%。2.5　比活性每mg蛋白质所含人凝血因子Ⅷ的效价应≥0.25IU。2.6HBsAg检测用敏

6、感性为1ng/ml以下的试剂盒检测，应为阴性。2.7　抗HCV检测用敏感的方法检测，应为阴性。2.8抗HIV-1及2检测用敏感的方法检测，应为阴性。2.9　无菌试验样品溶解后按《生物制品无菌试验规程》进行。2.10　安全试验2.10.1　豚鼠试验用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品15IU，注射后半小时内动物不应有明显的异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。2.10.2　小白鼠试验用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品1.5IU，半小时

7、内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。2.11　热原质试验按《生物制品热原质试验规程》进行，注射剂量按家兔体重注射10IU/kg。判定标准按该4.2项要求进行。2.12　鉴别试验用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。2.13根据病毒灭活方法，必要时应增加相应的检定项目。3　保存与效期应严格保存于10℃以下避光干燥处，运输期间亦应冷藏。效期自效价检定合格之日起为2年。附录1　人凝血因子Ⅷ效价测定（一步法

8、）1　试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。1.1.1　咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml　0.1mol/L盐酸，然后被　加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。1.1.23.8%