wnt信号通路参及中脑多巴胺神经元损伤地研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘1英文摘要⋯⋯·⋯·一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3第一部分前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“5材料与方法⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯-⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15第二部分前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘17材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一18结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·40综述ERK传导通路神经生物学进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一49万方数据温州医科大学硕士学位论文wnt信号通路参与中脑多巴胺神经元损伤的研究中

3、文摘要经典Wnt信号通路在中脑多巴胺神经元发育的过程中至关重要，一些研究提示这条通路可能与帕金森病(Parkinson’disease，PD)发病相关，但都一致缺乏基因敲除小鼠的证据。Wnt信号通路中重要的分子包括低密度脂蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白6(LRP6)、13-catenin。LRP5／6是Wnt信号通路中共受体，能分别与Wnt．fzd形成三聚物。13-catenin是调控wnt信号通路的重要分子，有研究发现13-catenin在中脑DA神经元发育中不可或缺。本实验采用cre．10xp

4、策略制备DA神经元内选择性敲除LRP5，LRP6和13-catenin的条件性基因敲除(CKO)小鼠。首先，通过地高辛标记的13-catenin原位杂交探针，检测了13-cateninmRNA在黑质区域的表达情况。结果显示，13-cateninmRNA阳性细胞在对照组正常小鼠中脑黑质致密带(SNc)处有表达。而13-cateninCKO小鼠该区域的原位杂交信号明显下降。因此，原位杂交表明13-cateninCKO小鼠的中脑黑质内15-catenin明显下降，一些残存的信号可以是非多巴胺神经表达的[3

5、-catenin。由于LRP5mRNA和LRP6mRNA原位杂交信号广泛分布，信号较弱。因此我们采用免疫组化方法对敲除效率进行验证。市售的抗体同时识别LRP5和LRP6，因此对三组小鼠(LRP5CK0，LRP6CKO和U心5／LRP6双重CKO)进行了验证。正常对照组小鼠黑质LRP5／LRP6阳性信号强，大量与TH阳性细胞共标。LRP5／LRP6双重CKO小鼠黑质处LRP5／LRP6无阳性表达，与黑质TH阳性细胞不共标。与正常组小鼠相比，LRP5CKO与LRP6CKO小鼠LRP5／LRP6阳性信号减

6、弱，与TH阳性细胞共标的细胞减少。本结果间接证明LRP5CKO和LRP6CKO黑质内上述基因被敲除。验证LRP5，LRP6和13-catenin成功敲除后，再通过免疫组织化学方法观察这三种CKO小鼠，成年时期中脑黑质内酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase．TH)免疫反应阳性数量是否发生改变。发现LRP5，LRP6缺失后小鼠中脑DA神经元的数量没有改变，而13-catenin敲除的小鼠中脑DA神经元的数量下降，由此验证lB-catenin参与DA神经元发育的观点。继而在这些小鼠上进行P

7、D发病的环境损害因素的测试，采用的方法是腹腔注射神经毒素1．甲基-4苯基．1，2，3，6．四氢吡啶(MPTP)15mg／kg，每日一次，持续注射5周后，正常小鼠组、LRP5CKO小鼠组和LRP6CKO小鼠组黑质TH．阳性神经元数量均降低。但是LRP5和LRP6CKO小鼠TH阳性细胞下降的程度低于MPTP处理的正常对照小鼠。此结果提示在中脑DA神经元中特定敲除LRP5和LRP6在一定程度上保护了DA神经元抵抗神经毒MPTP的损害。另外，虽然13-cateninCKO小鼠黑万方数据温州医科大学硕士学位论

8、文质DA神经元的数量在生理盐水处理时就比较少，但是经MPTP处理后13-cateninCKO小鼠黑质DA神经的数量却与正常小鼠相当。表明13-catenin缺失时和LRP5／6CKO小鼠一样DA神经元对MPTP毒素有抵抗作用。以上结果提示Wnt信号通路缺失可能在MPTP引起的中脑DA神经元损伤中具有一定的保护作用，有助于深入认识多巴胺神经元损伤的生物学机制。关键词：低密度脂蛋白5；低密度脂蛋白6；13-catenim1一甲基一4苯基一1，2，3，6一四氢吡啶；多巴胺神