亲水相互作用色谱方法开发和故障排除-agilent

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1、技术概述亲水相互作用色谱方法开发和故障排除前言亲水相互作用色谱(HILIC)是高效液相色谱(HPLC)领域中一种快速发展的色谱技术。即使是强极性的化合物也能通过HILIC使用与反相HPLC相同的系统和溶剂实现分离。相比传统技术（如衍生化、离子交换、离子对和正相HPLC），HILIC大大降低了极性分析的成本和工作量。然而，即便对经验丰富的色谱工作者来说，HILIC的方法开发和故障排除仍然是一项挑战。直到最近，HILIC色谱柱才有了和成熟的反相键合相相媲美的性能和重现性。本技术概述介绍了HILIC的基本原理和方法开发，并在最后对故障排除进行了

2、总结。了解HILIC和极性分析弱极性溶剂强极性溶剂（流动相B）（流动相A）HILIC的色谱柱分析可保留中极性至高极性的化合物。此范围THF<丙酮<乙腈

3、低分配效应，当流性溶剂，加入醇类物质可以增加缓冲液溶解度或稍微改变选动相含水量约为50%时，分配效应将完全消失。此时，HILIC择性。将不再保留化合物。极性化合物技术―HILIC与其他方法的对比HILIC的流动相为极性更强的溶剂，这与反相HPLC相反。其极性化合物的分析方法有很多种。不同的方法有其各自的优点中水是极性最强的流动相，其次是甲醇。图1所示为极性强和缺点，如表1所示。度递增的溶剂列表。缓冲盐也可增加溶剂强度，但并不明显。相比之下，HILIC是一种强大且灵活的技术，如表2所示。表1.传统技术的优缺点技术优点缺点系统污染频繁快速分析

4、离子对可能造成离子抑制使用标准HPLC系统和反相色谱柱限制运行为仅正离子或负离子模式MS比现有HPLC/UHPLC耗时，系统和消耗品价格高离子色谱机制简单，保留性强，可预测性分离无法同时分离阳离子和阴离子独有的检测模式难以兼容MS比HPLC耗时离子交换机制简单，保留性强，可预测性分离无法同时分离阳离子和阴离子填料廉价易得难以兼容MS有机溶剂的安全性和兼容性正相快速分析固定相选择范围窄使用标准HPLC系统和常用色谱柱样品溶解度问题冗长的样品前处理过程快速分析衍生化重复性问题量身定制选择性复杂的MS谱图增加发色团或荧光发色团有毒的衍生化试剂表

5、2.亲水相互作用色谱的优缺点技术优点缺点快速分析样品在高浓度有机溶剂中的溶解度使用与反相HPLC相同的系统和溶剂HILIC100%甲醇不适合作为有机相可在单次运行中分离阳离子、阴离子和极性中性化合物需要使用惰性硬件与HPLC相比，有可媲美或更好的MS性能2HILIC入门指南起始参数固定相：HILIC方法开发的第一步是选择色谱柱。与非极性反相固定相•不同固定相具有不同的选择性相比，HILIC色谱柱使用极性固定相。未键合硅胶是最传统且最为常用的HILIC固定相。但是，未键合硅胶表面的多变性•新型键合相可提供优异的峰形，最大程度降低离子交换引和

6、酸性使其很难可靠地实现多种常见极性化合物的分析。目前起的次级相互作用已经开发出多种键合HILIC固定相可提供不同的选择性和更高•AgilentInfinityLabPoroshell120,2.7µm粒径的三种固定相的可靠性。新型HILIC固定相能展现可媲美反相键合相的分离•InfinityLabPoroshellHILIC-Z―采用专利化键合技度、峰形和可靠性。术的两性离子键合相，可在较宽pH范围内提供强大除了选择合适的色谱柱之外，HILIC还需要对反相色谱分离的的分离、稳定性和优异的峰形运行参数进行修改。参数修改与极性和保留之间的反向

7、关系相•InfinityLabPoroshellHILIC-OH5―果聚糖键合相，关：保留极性化合物，不保留非极性化合物，溶剂强极性，溶具有不同的选择性和出色的峰形，适用于各种极性化剂弱极性等。合物•InfinityLabPoroshellHILIC―传统的未键合硅胶固定相B10B3HILIC-OH5CB9B2B1B6B120.51.01.52.02.53.03.5minB10B1CHILIC-ZB3B2B9B6B120.51.01.52.02.53.03.5minB10HILICB2B3B9B1B6CB120.51.01.52.02.5

8、3.03.5min图2.水溶性维生素的分离。色谱柱：2.1×100mm,2.7µm，参见固定相的示意图。流动相A：100mmol/L乙酸铵+0.5%乙酸（pH约4.6）水溶液。流动相B：乙腈。