padi4基因在白血病细胞定向分化或凋亡中的作用与关键机制研究

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1、济南大学硕士学位论又用价值，我们应该进一步研究该靶点，使其作为一个有效的临床诊断的工具。我们在前人研究的基础上，初步探讨PADl4与白血病细胞分化的关系，为白血病的临床治疗提供新的理论依据和治疗靶点。目的本课题在以上研究背景的基础上，通过体外实验探讨PADl4基因与白血病细胞分化是否有关为切入点，重点观察HL60细胞经全反式维甲酸诱导向粒系分化后PADl4表达变化，以及调控PADl4表达后对细胞分化的影响，拟验证PADl4基因与白血病的关系，为白血病的临床治疗提供一种新的治疗靶点。方法通过WB、RT-PCR方法检

2、测HL．60、K562、U937等共9种不同类型白血病细胞中PADl4的表达情况，收集不同类型白血病患者的临床骨髓活检标本，通过免疫组织化学技术检测PADl4的表达情况。分别建立全反式维甲酸或三氧化二砷诱导HL60细胞模型，于诱导的Oh、24h、48h、72h和96h分别在转录和翻译水平检测PADl4表达变化。体外细胞实验，采用RNAi技术以及构建PADl4真核表达载体转染至HL60细胞，调控PADl4在HL60细胞中的表达，观察对细胞分化的影响。每组实验均重复3次，实验数据结果采用均数4-标准差表示，均数采用T

3、检验或单因素方差分析，以P<0．05为有统计学意义。RANi技术干扰PADl4表达，观察对细胞分化的影响。让甲：日才弋9株不同的白血病细胞中PADl4均有表达，不同类型白血病细胞表达量不同；全反式维甲酸诱导HL60细胞后，在诱导的96h内，PADl4在转录和翻译水平呈现出一致的降低趋势，通过灰度值比较与对照组相比以及四个时间点两两比较均具有统计学意义(P<0．05)；而三氧化二砷诱导HL60细胞后，在诱导的96h内，PADl4在转录和翻译水平呈现出一致的升高趋势，通过灰度值比较，与对照组相比以及四个时间点两两比较

4、均具有统计学意义(P<0．05)；43例白血病患者骨髓IllPADl4基因在白血病细胞定向分化或凋亡中的作用及关键机制研究活检标本中PADl4具有表达，主要表达在胞浆，并且显著高于正常对照组，不同的白血病类型PADl4表达不同。结论PADl4基因与白血病细胞的分化和凋亡有关。随着HL60细胞分化程度的提高，PADl4在转录和翻译水平均逐渐降低；高水平的PADl4表达可以诱导HL60的凋亡；PADl4基因是白血病治疗的潜在治疗靶点。关键词PADl4；白血病；HL60细胞；ATRA；As203；分化；凋亡IV济南大学

5、硕士学位论文ResearchOiltheeffectsofPADl4geneonleukemiadifferentiationorapoptosisandkeymechanismsBackgroundPostgraduateInstructorHongjiangLIGuoshengJiangMajorMedicineABSTRACTPeptidylargininedeiminase4wasinitiallyclonedfromHL．60cellline(humanpromyelocyticleukemiacell

6、s)。Theenzymeentersitsactivestateforthecatalysisofarginineresiduesintocitrullineresiduses．PADl4ispredominantlyexpressedinbloodlymphocytesandhasbeensuggestedtoplayaroleininflammationandmeimmuneresponse·BecausePADl4Wasalsodetectedingranulocytesandmacrophagesindu

7、cedbyHL60cells，theenzymeisbelievedtobeinvolvedinthedi疏rentiationandapoptosisofthesecells．However,littleisknownabouttheprecisefunctionandtargetsubstratesofPADl4underphysiologicalconditions．Leukemiaisoneoftheleadingcausesofdeathinhumans．Inrecentvears．studiesfou

8、ndthatPADl4ishighlyexpressedinavarietyofmalignanttumorsandthatitparticipatesintheprocessoftumorigenesis．ThisreviewhighlightsPADl4expressionintumortissuesaswellasthepotentialroleofPADl4int