ctgf+sirna质粒对uuo小鼠肾脏间质纤维化的影响

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1、英文摘要fibrosisandinterstitialmatrix.TheresultssuggestthatsiRNA-targetingofCTGFhasthepotentialtobeanovelstrategyforameliorationofRenalFibrosis.Keywords:connectivetissuegrowthfactor;smallinterferingRNA;renalfibrosis;TGF-β1;α-SMA7河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研

2、究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：导师签名：二级学院领导签章：年月日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章：年月日研究论文CTGFsiRNA质粒对UUO

3、小鼠肾脏间质纤维化的影响前言肾间质纤维化（renalinterstitialfibrosis,RIF）是各种细胞、细胞因子、炎症因子、炎症介质等诸多因素的相互作用，导致细胞外基质(ECM)代谢失衡，在间质异常积聚所致。其机制之一：各种肾脏损伤因素导致间质炎症细胞浸润、成纤维细胞激活和肾小管上皮细胞表型转化，生成肌成纤维细胞。肾间质肌成纤维细胞是产生肾间质细胞外基质的重要细胞，它能产生过多的ECM成分。继之，多种具有促进纤维化作用的细胞因子(如TGF-β1、CTGF、PDGF等)和血管活性物质(如Ang-Ⅱ)释放，影响ECM合成和降解的动态平衡，导致ECM成分积聚，从而

4、促进纤维化的发生。调控ECM代谢的基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂(MMPs/TIMPs)系统和纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物组织抑制剂(PA/PAI)系统在各种细胞因子、细胞等因素作用下发生功能紊乱，使ECM[1]降解减少。细胞因子在RIF中起重要作用。目前预防肾脏纤维化已成为研究热点。以基因技术为基础的治疗方法能干预细胞因子的作用，阻断和延缓肾纤维化发生发展。转化生长因子β1(TGF-β1)是公认的致纤维化因子。主要表现在：①促进细胞外基质合成，可促进多种ECM成分如Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型胶原和多种蛋白多糖的生成，抑制降解ECM成分的酶的合成，同时促进整合素表达而增

5、强细胞外基质相互作用。②TGF-β1通过自分泌和旁分泌方式作用于成纤维细胞和单核细胞，[2]促进细胞外基质及细胞因子的表达分泌，从而促进纤维化进程。体内短期消除TGF-β活性，能够减轻动物模型的肾脏纤维化，阻断TGF-β系统，是防止肾脏纤维化的有效途径。但是由于TGF-β除了能促进纤维化，还有抗增生，抗炎症的作用，长期完全阻断TGF-β系统势必会产生不良的后果。CTGF是即刻早期反应基因CCN家族之一，CTGF的表达，受高糖环境、TGF-β、CTGF自身、血循环机械应力、糖皮质激素、肿瘤坏死因子α的影响。CTGF是TGF-β促纤维化活性的下游信号介质，刺激细胞增殖及细

6、胞外基质的形成，在肾脏纤维化中有重要的作用。通过阻断CTGF可能减轻TGF-β诱导组织纤维化的效应，同时保留TGF-β有利的抗炎和抗肿瘤8研究论文细胞增生的效应。因此，CTGF可作为更加特异性的药物作用的靶位点，为以后具有组织特异性手段的基因治疗，提供基础，成为防止肾脏纤维化领域新的研究点。RNA干扰(RNAi)技术通过产生内源性特异序列的小干扰RNA(siRNA)，诱导特异靶基因mRNA降解，从而使该基因“沉默”。化学合成小分子干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)已证实能在哺[3,4]乳动物体内外介导同源基因沉默，并发挥治疗作用。本研究利

7、用单侧输尿管梗阻(unilateralureteralocclusion，UUO)小鼠肾纤维化模型，采用尾静脉注射的方法整体转染CTGF-siRNA质粒抑制肾脏CTGF的表达，观察敲低CTGF表达对肾脏间质纤维化的影响。9研究论文材料与方法1材料1.1仪器ZD-IIIB型医用微波炉上海中达医学研究所电热恒温箱重庆实验设备厂石蜡切片机德国LEICA公司石蜡包埋机德国LEICA公司冰冻切片机德国LEICA公司台式高速冷冻离心机北京四环科学仪器厂旋涡混合器上海精科实业有限公司超低温冰箱日本SANYO自动三重纯水蒸馏器上海亚荣生化仪器厂压力蒸汽灭菌器博迅实业