NYT568-2002-肠病毒性脑脊髓炎诊断技术.pdf

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1、ICS11.220B41中华人民共和国农业行业标准NY/T568=2002肠病毒性脑脊髓炎诊断技术Diagnostictechniquesforenterovirusencephalomyelitis2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布541Nv/f5682002AIJ舌本病属于细小核糖核酸病毒科的肠道病毒属肠道病毒(型(简称YEV),病毒主要感染动物的中枢神经系统并繁殖，使运动神经节细胞变性，导致非化脓性脑脊髓炎此病多见于哺乳仔猪和断奶仔猪，成年猪多为隐性感染，引起发烧、庆食、共济失调、四肢麻痹和痉挛，该病的发病率和死亡率都很高，造成严重的经

2、济损失肠病毒r1.脑脊髓炎(Entcrovirusencephalomyelitis),曾称做捷中/塔尔凡氏病(Teshen/Talfandisease),是猪的一种严屯病毒性传染病，被世界动物卫生组织[World()rganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE〕和我国农业部分别列为l3类和二类动物疫病本标准是依据(NE((诊断试验和疫苗标准手册》(2000年版)(ManualofStandardsforDiagnostic'bestsandVaccines,2000)第2.6.3章规定的主要

3、技术制定的。两者的主要差异是:一本标准根据本国和国外实践经验规定厂使用主要致病原YEV1)V病毒作为抗原.未采用2-13型YEV，未采用酶联免疫吸附(ELISA)技术;-一本标准根据本国实践经验将操作程序更加具体化。本标准附录A、附录B是规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出本标准山全国动物检疫标准化技术委员会归门。木标准起草单位:农业部动物检疫所。本标准主要起草人:封启民、李昌琳。Nv/T568--2002肠病毒性脑脊髓炎诊断技术1范围本标准规定了(猪)肠病毒性脑脊髓炎诊断技术要求本标准适用于(猪)肠病毒性脑脊髓炎的病原鉴定及流行病学检查。进出l7检疫和免疫抗体的检测2临床症

4、状检查临床上分为四个型，即急性型、亚急性型、慢性型和温和型，此外还有无症状仅检出抗体的隐性感染，根据临床症状和病理变化(见第3章)可作出怀疑性诊断该病潜伏期为2d一28d2.1急性型病猪首先出现体温升高，多在40.0C-41.1C左右或更高，病猪表现为厌食、倦怠、呕吐、严重鼻炎、腹泻及行动失调。发病1d--2d后，体温降至正常，出现中枢神经系统症状，如寒战、感觉过敏、抽搐、共济失调、四肢僵直(特别是后肢)、角弓反张和昏迷，接着发生麻痹，病猪呈犬坐姿或于一侧卧地，前肢作划水样.受声响或触摸刺激时，可引起四肢不协调运动，或角弓反张，也可见面部麻痹和失音。病猪发生便秘。传染性脑脊髓炎的

5、病程发展迅猛，瘫痪出现后的2d--3d.就有80%-95%的病猪可因呼吸中枢麻痹而死亡.有些病猪死于吸人性肺炎，有些病例急性期之后食欲有所恢复，但见消瘦并伴有麻痹症状。2.2亚急性型病程为6d-8d.症状与急性型相似，但较轻缓，死亡较少2.3慢性型多发于成年猪，病程为几周到几个月，特征为沉郁、行动困难，尾部麻痹、前肢瘫痪，其中有20%的病猪因肺炎、褥疮、败血症等原因死亡。2.4温和型毒力较低的毒株引起，症状较轻，发病率和死亡率较低，主要侵害仔猪病初体温升高，运动失调这些症状大多在几天内消失，但有些病猪则随后出现兴奋、发抖、平衡失调、运动失调.最后麻痹等症状3组织病理学检查组织学诊

6、断采集的样品有大脑、小脑、间脑、延髓和颈腰部脊髓这此样品用甲醛固定，制成切片，用常规组织学方法染色，显微镜检查可发现血管周围非化浓性淋巴细胞浸润，浸润现象限于灰质部，偶尔波及白质部。间脑和小脑有明显的变化;大脑半球较轻，病的后期神经兀细胞变性.并被胶质结缔组织细胞代科;常见非化浓性脑脊髓炎，特别是在小脑部分4病毒分离及鉴定4.1材料准备4.1.1病料的采集将发病期的猪扑杀，用无菌操作法取脑和脊髓样品，放在pH7.2的磷酸Ita缓冲A(PBS),I'(PBSNY/'r5682002和甘油等录棍合)，配力见附录八4.1.2细胞PK,或MRS:猪肾细胞，至生民良好的单层细胞4门.3细胞

7、培养液配方见附录B4.2病料的处理4.2门处理4.2.1.1将组织块切碎，在研钵中，用PBS制成质量浓度为10的组织悬液，70C冻融1+41eKa4.2门.2以5000r/min离心30min4.2.13取r清，以1:1的比例加三氯甲烷，充分震荡，混合1h,置于4('14h-16h再以同样速度离心30min，从水相底部取出病毒接种液4.2.1.419毫升加入10001U青霉素和1000ug链霉素，室温静置1h4.2.2病毒分离操作方法单层原代猪肾细胞或猪肾传代细胞、如PK或IBR