GBT27527-2011禽脑脊髓炎诊断技术.pdf

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1、ICS11．220B41雷雷中华人民共和国国家标准GB／T27527—2011禽脑脊髓炎诊断技术Diagnostictechniquesforavianencephalomyelitis2011-11-21发布2012—03-01实施宰瞀鹊鬻瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会“”。标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖罱GB／T27527--201本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(sAc／Tc181)归口。本标准起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古动物疫病预防控制中心、中国

2、动物疫病预防控制中心、北京世纪元亨动物防疫技术有限公司、扬州大学、青岛易邦生物工程有限公司。本标准主要起草人：赵振华、赵心力、陈西钊、孙明、王金玲、秦爱建、范根成、李瑞刚、乌El罕。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围禽脑脊髓炎诊断技术GB／T27527--201本标准规定了禽脑脊髓炎诊断技术，包括流行病学、临床症状、组织病理学变化、病毒分离、琼脂免疫扩散试验、中和试验和间接免疫荧光试验。本标准适用于禽脑脊髓炎的诊断、检疫和流行病学调查。2缩略语下列缩略语适用于本文件。AE(V)：禽脑脊髓炎(病毒)Eavianencephalomyelitis(vir

3、us)]AEV-VR：禽脑脊髓炎病毒VanRoekel株(AEV标准株)(avianencephalomyelitisvirus—VanRoekel)EID5。：鸡胚半数感染量(egginfectiousdose)FITC：异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate)H．E．染色：苏木素一伊红染色(hematoxylin—eosinstaining)PBS：磷酸盐缓冲液(phosphatebuffersaline)3流行病学除鸡易感AEV外，雉鸡、鹌鹑、火鸡和山鸡也可自然感染。无本病史和未经免疫的鸡群一旦感染，雏鸡发病率通常为40％～60％、

4、死亡率为10％--80％或更高。不同日龄的鸡一年四季均可感染。随日龄的增长，鸡对AEV的抵抗力不断增强。感染鸡的种蛋可以引起后代鸡胚和雏鸡发病(垂直传播)；同时，病鸡的分泌物和排泄物可污染环境、饲料和饮水，引起与其接触的易感鸡发病(水平传播)。自然情况下4周龄以内的雏鸡(幼禽)对AEV最易感；实验室情况下，1日龄雏鸡脑内接种AEV强毒5d--7d后可发病；经胚胎感染的雏鸡出壳后潜伏期1d--7d，口服感染或自然接触一般9d～11d后发病。4临床症状自然感染和人工感染雏鸡的临床症状基本一致，初期精神沉郁、嗜睡、易惊、斜视、呈半蹲姿势、头颈偏向一侧、饮水困难，双腿紧缩、

5、叉开或爪蜷缩，以后可出现站立不稳、进行性运动失调、头颈快速震颤等症状，甚者常因瘫痪、衰竭而死亡。成年鸡感染后一般不出现明显症状，有时仅见轻微腹泻，产蛋率下降10％～40％和种蛋孵化率降低。5组织病理学变化5．1材料准备5．1．1器材石蜡切片机、染色缸、载玻片、盖玻片、水浴锅、温箱、显微镜等。标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T27527--2015．1．2试剂10％中性福尔马林溶液、酒精、二甲苯、切片石蜡、}LE．染色液、中性树胶等。5．1．3样品临床可疑AE病例的大脑、中脑、小脑、延脑和腰荐部脊髓样品。5．2操作方法分别切取小块(o．5cm3～lc

6、m3)大脑、中脑、小脑、延脑和腰荐部脊髓样品置10％中性福尔马林溶液中固定24h～48h。常规制片、HE．染色、中性树胶封片、光镜观察。5．3病理变化5．3．1中枢神经系统典型的组织病理学变化为非化脓性脑脊髓炎，主要包括大脑、中脑、小脑、延脑和脊髓的变质性变化、血管反应和胶质细胞增生。5．3．2变质性变化表现为神经细胞变性和神经组织出现小软化灶。变性的神经细胞肿大、淡染或浓缩，有的呈现中央染色质溶解现象。变性严重的神经细胞和局部神经组织可发生坏死、液化，形成小软化灶。5．3．3血管反应表现为血管出现以淋巴细胞为主的围管性细胞浸润，浸润的细胞在血管周围散在或呈多层围绕

7、，形成管套。5．3．4胶质细胞增生表现为增生的胶质细胞可出现在变性神经细胞周围形成卫星现象，或进入坏死的神经细胞中吞噬坏死物形成噬神经原现象。在软化灶处有数量不等的胶质细胞增生和聚集形成胶质小结。5．4结果判定若5．3．2～5．3．4同时出现时则为非化脓性脑脊髓炎的典型病变，若主要出现5．3．3，而5．3．2不明显时，可能与免疫反应有关，常见于免疫鸡群。通过流行病学、I临床症状和组织病理学变化可对AE做出初步诊断，在初步诊断的基础上，进行病毒分离(见第6章)。6病毒分离6．1材料准备6．1．1器材无菌剪刀、镊子、平皿、烧杯、玻璃瓶、组织研磨器、注射器，孵化器、离