菌群构成与细菌性阴道病的相关性研究

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1、山东大学博+学位论文菌群构成与细菌性阴道病的相关性研究中文摘要研究背景细菌性阴道病(bacterialvaginosis，Bv)是育龄期妇女的常见病、多发病，是由于阴道内微生态平衡失调，非正常阴道菌生长过盛所致对阴道有保护作用的乳酸杆菌减少，厌氧类细菌大量繁殖导致的一类多微生物病。BV是妊娠妇女最主要的并发疾病，与胎儿低体重、早产、新生儿死亡及产妇继发感染等不良妊娠结局有关。临床用甲硝唑和克林霉素按标准方法治疗BV，3月内复发率高达30％，其中最主要原因是对BV的病因，特别是病原学缺乏深入了解，很多

2、细菌不易培养，导致阴道分泌物的病原菌组成和分类研究进展缓慢，因而缺乏有效的预防和治疗措施。近年来，不依靠细菌培养测定细菌种属的分子生物学方法得到应用推广，使研究者可以探索微生物群落内部的种群结构和变迁。本项目在前期研究的基础上，以BV阳性和阴性妇女为研究对象，采用变性梯度凝胶电泳(denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)和DNA测序技术分析细菌16SrDNA的特征序列信息，将16SrDNA与数据库进行比对，从“属’’、“种’’水平对阴道分泌物中的细菌类群进

3、行鉴定。应用凝胶图像分析系统计算细菌种属的相对含量。采用对应分析法证明BV相关细菌，采用logistic回归分析不同菌群组成以及其他相关因素与BV的关联，为进一步防治研究提供依据。研究目的探讨与BV相关的细菌种属；研究正常阴道细菌和BV相关菌的相对含量与BV的相关性；探讨人口学特征以及卫生习惯等宏观因素与BV的关联性，为BV的病因研究提供线索，为BV的防治研究提供依据。研究内容和方法一、阴道微生物群落的检测方法采用革兰氏染色Nugent评分法结合商业试剂盒对BV作出临床诊断。以目前常用的DGGE方法

4、为基础，重新设计了DGGE实验装置的关键部件制胶板组山东大学博十学何论文件，扩展了DGGE方法的条带分辨率范围和装置使用的灵活性，并采用切胶重新PCR扩增并测序的手段获得细菌的16SrDNA遗传信息，并与数据库进行比对，以序列相似程度>t97．5％作为序列同源性标准。利用DGGE凝胶图像分析系统计算每个细菌标本中各细菌种属的相对含量，实现了对阴道微环境细菌群落的定性和定量分析的有机结合。二、阴道菌群构成及其他相关因素与BV的相关性(BV的危险因素研究)用自行设计的调查问卷调查196名育龄期妇女，问卷

5、内容包括一般人口学特征、卫生习惯、婚育史以及主要妇科诊断等。采用对应分析法确定BV相关细菌，采取卡方检验分析不同细菌种属在BV阳性组和BV阴性组的检出率差异，采用t检验分析不同菌属的相对含量在2组间的差异，logistic回归分析不同菌群组成以及其他相关因素与BV的关联强度。研究结果第一部分阴道微生物群落检测方法的研究1．全部196名妇女共检出细菌种属59种，正常组检出14种，BV组检出55种。2．68名BV阴性妇女中，每名妇女可检出1．5个不同菌属，平均检测到2．59种；128名BV阳性妇女中，每

6、名妇女可检测到1-9个不同菌属，平均检测到4．05种，二者比较有显著统计学差异伊

7、illusiners)、阴道加特纳菌(Gardnerellavaginalis)、ultunensis乳酸杆菌(Lactobacillusultunensis)、阴道阿托波氏菌(Atopobiumvaginae)和fungorum伯克霍尔德氏菌(Burkholderiafungorum)。4．细菌进化关系分析显示59中检出细菌分为2个大类，分别定义为阴道正常菌群，和BV相关菌群。其中阴道正常菌群包括双歧双歧杆菌(Bifidobaeteriumbifidum)、massiliae消化链球菌(Pepto

8、streptococcusmassiliae)、Amnionii纤毛菌属(Leptotriehiaamnionii)、惰性乳酸杆菌(Lactobacillusiners)、ultunensis乳酸杆菌(Lactobacillusultunensis)、和约氏乳酸杆菌(Lactobacillusjohnsonii)共6种。2山东大学博十学位论文5．研究发现有2个检出的细菌种属16SrDNA特征DNA序列与数据库序列的同源性<97．5％(96．835％VsLactobac