应用胰岛新生相关蛋白（ingap）体外诱导胰岛新生

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1、南京医科大学硕士学位论文中英文缩写对照表INGAPIsletneogenesisassociatedprotein胰岛新生相关蛋白ILCsIslet—likecellclusters胰岛样细胞团CKl9cytokera恤19细胞角蛋白19PDX．1PancreaticduodenalTGF-131EGFbFGFhomeodomain-containingprotein1Transforminggrowthfactor-131Epidermalgrowthfactor胰腺十二指肠同源盒1转化生长因子p1表皮生长因子Basicfibroblastgro

2、wthfactor碱性成纤维细胞生长因子FBSFetalbovineserumBSABovineserumalbuminDTZDithizoneFITCFluoresceinisothiacyanateELISAGSIS胎牛血清牛血清白蛋白双硫腙异硫氰酸荧光素Enzyme—linkedimmunoabsorbent酶联免疫吸附测定assayGlucosestimulatedinsulinsecretion葡萄糖刺激的胰岛素释放STZStreptozotocin3试验链脲菌素南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文座题遮鱼堑生担差蛋鱼(丛鱼△里)

3、佳处透昱遮垒堑生是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：内匆冷疑心嘛者签名：叩氯吻参日期：!墨：!兰!!论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：堡：堕刷币签日期：塑!星：!坌：7

4、南京医科大学硕士学位论文应用胰岛新生相关蛋白(INGAP)体外诱导胰岛新生中文摘要第一部分大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养和鉴定目的建立成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定的方法。方法V型胶原酶溶液灌注消化成年大鼠胰腺组织，并经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织，然后培养于含10％胎牛血清的RPMll640培养液，而后加入EGF(表皮生长因子)和bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)继续培养，7天可形成单层细胞，用0．25％胰酶．EDTA消化并传代培养。取第2代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CKl9、Pdx．1、Nestin、

5、insulin及glucagon的表达。结果经胶原酶灌注消化胰腺导管上皮，再经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织，可使胰腺导管细胞得到较好的纯化。免疫荧光结果示胰腺导管细胞CKl9、Pdx．1和Nestin染色呈阳性，阳性细胞率分别为(88．6±6．2)％，(84．6±8．6)％，(79．3±10．5)％，而insulin及glucagon染色为阴性。RT-PCR结果显示该细胞表达CKl9、Pdx一1和Nestin基因。结论该方法可较好的分离出胰腺导管细胞，经鉴定该法培养所获细胞具有胰腺干细胞的特性。关键词胰腺；导管细胞；干细胞；细胞培养4南京

6、医科大学硕士学位论文第二部分应用INGAP体外诱导胰腺导管干细胞向胰岛D细胞分化目的建立体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，应用胰岛新生相关蛋白(INGAP)建立新的诱导分化体系，实现体外胰岛新生。方法体外分离培养SD大鼠胰腺导管干细胞，选取第2～6代干细胞进行分步诱导分化，并于分化后期进行分组培养，INGAP组加入INGAP多肽，而对照多肽组加入对照多肽，诱导结束后收获两组新生类胰岛样细胞团(ILCs)分别行免疫荧光染色和RT-PCR检测insulin和glugagon的表达，并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价新生ILCs

7、的胰岛素分泌能力。结果第2～6代胰腺导管干细胞经过体外四步诱导分化，INGAP组和对照多肽组均可形成ILCs，免疫荧光染色结果显示ILCsinsulin牙口glucagon染色均为阳性，RT-PCR检测结果也证明INGAP组和对照多肽组ILCs均有insulin和glucagon基因的表达，其中insulin基因的相对表达量INGAP组为0．324±O．09，对照多肽组为o．102士O．04，两组比较差异有统计学意义(P

8、统计学意义(P