灰树花多糖与其硫酸化衍生物的结构鉴定和生物活性研究

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1、2009届研究生硕士学位论文学校代码:10269学号:51061300115·季束峰托术带灰树花多糖及其硫酸化衍生物的结构鉴定和生物活性研究院系生命科学学院专业生物医学研究方向细胞生物化学指导教师张红锋副教授硕士研究生毛逸嵘2009年5月完成UniversityCode:10269DissertationforMasterdegree.ZOOgStudentID:51061300115乞astC爪na灿舰a[习n俪rsi妙Strueturalidentifieation&bioaetivitystudyofPolysaeeharide

2、sfrom分ifOJafr朋dosaandtheirsulfatedderivativesSehQ过ofLi仓五亚塑丝Aeademic:Major:ResearchArea:Advisor:M.S.Candidate:May，2009独创性声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确说明并表示谢意。作者签名:日期沙.乡学位论文授权使用声明本人完全了

3、解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名泥逸琢导师签名:详。咋日期‘·弓日期例，，合，弓毛逸嵘硕士学位论文答辩委员会成员名单姓姓名职称单位备注注孙孙心德教授华东师范大学生命科学学院院主席席王王耀发教授华东师范大学生命科学学院院顾顾福康教授华东师范大学生命科学学院

4、院丘口.刁{王州JJ倪倪//、一厂不口1不1不华东师范大学生命科学学院院秘书书摘要灰树花(分了匆了a介oD由sa)是一种珍贵的食药兼用菌，多糖成分是其主要的生理活性物质。研究表明，灰树花多糖具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖等多种功效，而要确定这些药理作用的物质基础，就必须分离出均一的多糖组分。由于多糖类物质结构复杂，难于纯化，因此对灰树花多糖药理作用的研究大都停留在粗多糖水平上，从而制约了对灰树花资源的开发和利用。国内外对灰树花多糖组分的分离纯化研究亦有报道，但充分纯化的不多，且大多数都针对的是灰树花碱提组分。本文对灰树花高浓缩精粉的热水

5、提取物进行分离和纯化，并对所得的多糖均一组分进行初步的化学结构研究。为了进一步开发灰树花多糖的药用价值，本文还对所得的均一多糖进行硫酸化修饰并对其结构作初步的分析。同时，对灰树花多糖及其硫酸化衍生物进行生物活性测定。灰树花高浓缩精粉经热水提取获得水溶性灰树花粗多糖GFP。GFP依次经DEAE一Cellulose阴离子交换树脂及SephadexG一100葡聚糖凝胶分离纯化得到GFPI一F、GFPI一M及GFPI一L三种不含蛋白质的葡聚糖纯品，其分子量依次为1.09x105Da、1.93X104Da和2.76X10勺a。甲基化结果显示这三

6、种均一多糖所含的糖普键类型相同，为1，4一，1，3一及1，6一糖普键，分支点为1，3，6一连接葡萄糖。采用毗陡一氯磺酸法对其进行硫酸化修饰，硫酸化衍生物GFPI一FS、GFPI一MS及GFPI一LS的红外光谱分析表明，三个样品均在1236.90cm一‘和sn.81cm一’有硫酸酷键的特征吸收峰，’毛℃NMR证明C一6上的轻基被酷化。并且GFPI一FS的硫酸化程度最高，其DS为1.07;GFPI一MS与GFPI一LS的硫酸化程度相当，DS分别为0.66和0.61。MTT结果显示只有G即1一MS对A549细胞的生长具有较显著的抑制作用。与

7、阿霉素的协同实验结果显示GFP卜FS、GFPI一MS及GFPI一LS与0.2pg/mL阿霉素联用后，能明显提高疗效，其中200pg/mLGFPI一MS与阿霉素的协同效果最好，对A549细胞生长的抑制率可达64.51%。划痕法实验结果表明，GFPI一FS、GFPI一MS及G即1一LS均具有抑制人微血管内皮细胞(HMEC)迁移的活性，其中GFPI一MS的效果最为显著。关键词:灰树花;多糖;硫酸化衍生物;A549细胞;人微血管内皮细胞;MTT;划痕法Abstract分丁为了a介ondosa(GF)15akindofpreCiousedibl

8、eand二ediCalfungi.工tsmainaetiveingredient15Polysaeeharide.StudieshaveshownthatPolysaeeharidesfromGFhaveaetiviti