石斛的离体培养及遗传稳定性的分子检测

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1、石斛的离体培养及遗传稳定性的分子检测摘要石斛属(DendrobiumSw．)是兰科(Orchidaceae)多年生草本植物。在《本草纲目》中石斛被列为上品，具有明目强身、镇痛消炎、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效。本研究以金钗石斛为材料，在离体培养、遗传稳定性两领域开展了工作，以期为资源的离体保存、快繁等提供理论指导和构建技术平台，现取得以下结果：1茎段离体培养技术的建立与优化选用金钗石斛的嫩茎为外植体，用70％酒精浸泡30s后，分别用以下两种方式灭菌，1)0．1％升汞灭菌12min，2)0．1％升汞+数滴Tween80灭

2、菌lOmin；两种灭菌方式的灭菌效果差别很大，污染率分别为73．3％、16．7％。随后接种在Ms+BA(1．Omg／L)+N从(O．4mg／L)+蔗糖(3．O％)+琼脂粉(o．7％)培养基上，萌发后转接到Ms+BA(1．2mg／L)+NAA(0．4mg／L)+蔗糖(3．0％)+琼脂粉(0．7％)培养基上，通过器官型方式，诱导侧芽的萌发增殖；壮苗培养以绑s+NAA(0．5mg／L)+IBA(0．5mg／L)+蔗糖(2．O％)+琼脂粉(0．7％)培养基上效果最佳；生根培养以纵s+NAA(1．0mg／L)+蔗糖(2．o％)+琼脂粉(

3、0．7％)培养基上效果最佳；移栽时将一次性塑料杯底部及四周打上孔，先放入两个松果后再铺上苔藓或者树皮均能获得90％以上的移栽成活率。2金钗石斛愈伤组织培养体系愈伤组织诱导：采用无菌试管苗的茎段诱导愈伤组织，不同的基本培养基、生长激素、细胞分裂素及激素浓度对愈伤组织的诱导上有一定差异，诱导率为改良MS：>Ms>嘲s>>改良Ms。；NAA>IBA；BA>KT：在Ms+NAA(o．8mg／L)+队(o．5mg／L)+蔗糖(3．0％)+琼脂粉(0．7％)培养基上诱导率稍高。愈伤组织增殖：经综合评定，MS>啪s>改良Ms。>>改良MS。

4、；NAA、IBA>I从；蔗糖>葡萄糖；在Ms+NAA(0．8mg／L)+BA(0．5mg／L)+蔗糖(3．0％)+琼脂粉(0．7％)培养基上增殖效果最好，约90d左右增殖倍数可达23．98倍。愈伤组织培养的最佳时间是90一lOOd。愈伤组织再分化：GA对愈伤组织的再分化效果极强，远远强于BA、KT，当GA浓度为0．5—1．Omg／L时有利于诱导愈伤组织再分化，出苗整齐，生长状况好。丛生芽壮苗增殖培养：经愈伤组织再分化形成的丛生芽在Ms+IBA(O．4mg／L)+蔗糖(2．0％)+琼脂粉(0．7％)培养基上增殖效果及苗的生长状况

5、最好。3愈伤组织遗传稳定性的RAPD检测采用42个随机引物对金钗石斛不同继代次数的愈伤组织DNA进行RAPD检测，结果表明，愈伤组织在继代15代以内，没有检测到遗传变异，但在16代时，DNA分子标记变异率为O．11％。关键词：金钗石斛，离体培养，茎段，愈伤组织，遗传稳定性，分子标记4石斛的离体培养及遗传稳定性的分子检测AbstractDendrobium,agenusfromOrchldaceaeisakindofeliteherbageplantsinChinesetraditionalmedicine，whichchara

6、cterizedinmultiplefunctions，suchasinsenescence-retardingandcancer—preventing，eye—brighteningandbody—strenthering、immune—improvingetc．Tosatisfytheincreasingdemandofgermplasmconservation，micropropagation，aswellasthefurtherexploitation，j力vitrocultureandgeneticstability

7、evaluationtotheinvitromaterialsofthesegermplasmswerecarriedoutinthispresentstudy．Themainresultsareasf01lows：1EstablishmentofasepticculturesforshootsegmentsAfterrinsingwithtapwater，shootsegmentsofDendrobiumnobilewerefirstlydippedin70％ethanolfor30S．Secondly，theyweresu

8、rface—sterilizedbyimmersionin：1)O．1％(w／V)HgCl2for12min：2)0．1％(w／v)HgCl2with3-5dropsofTween80for10min．Theeffectofthetwomenthodswerequitedif