昆虫病原线虫共生菌中plu4436基因克隆和表达

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1、论文题目：专业：硕士生：指导老师：昆虫病原线虫共生菌中plu4436基因的克隆与表达农业昆虫与害虫防治石微邱礼鸿副研究员摘要昆虫病原线虫(entomopathogenicnematodes，EN)现已成为一类新型生物杀虫剂，己商品化并成功用于防治多种害虫。昆虫病原线虫共生菌在EN对害虫的致病力中起关键性作用。共生菌分泌的杀虫毒素具有高效、杀虫谱广的优点，已受到广泛关注。对这类杀虫毒素进行深入研究，可将其基因转入植物，或者构建高效表达系统生产杀虫毒素直接用于害虫防治，有助于延缓害虫对转Bt基因抗虫作物的抗性压力，扩大转基因抗虫作物的抗虫谱

2、。本研究用PCR方法从昆虫病原线虫共生菌株中扩增到Tplu4436基因。将其连接至t]pQE30载体上，并在大肠杆菌中进行诱导表达，得到了Plu4436蛋白。利用Ni．NTAagarose对该蛋白进行纯化，用Plu4436蛋白对四种鳞翅目昆虫棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾以及粉纹夜蛾的初孵幼虫进行了口服毒力测定，发现Plu4436蛋白对以上四种试虫均没有毒性。这一结果说明Plu4436蛋白单独表达可能没有杀虫活性，需要和其他蛋白联合作用才具有杀虫功效。关键词：昆虫病原线虫共生菌，plu4436基因，克隆表达Title：CloningandE

3、xpressionofplu4436genefromSymbioticBacteriaofEntomopathogenicnemotodesMajor：AgricuturalinsectsandpestscontrolNalne：ShiWeiSupervisor：QiuLihong，Ph．D．AbstractEntomopathogenicnematodes(EN)havebeenusedasbiologicalcontrolagent．BacteriaofthegeneraXenorhabdusandPhotorhabdushavea

4、mutualsymbioticrelationshipwithentomopathogenicnematodesofthefamiliesSteinemematidaeandHeterorhabditidae，respectively．ThebacteriaplayanimportantroleinthepathogenicityoftheENandbacteriacomplextoinsectpests．ItwasfoundthatsometoxinsofENsymbioticbacteriacouldeffectivelykilla

5、widerangeofinsects．GenesencodingthesetoxinsthereforebecomepotentialalternativesoftoxingenesfromBacillusthuringiensisforthedevelopmentofnoveltransgenicinsect．resistantplants．Inthepresentstudy,plu4436genewasobtainedbyPCRamplificationfromPhotorhabdusluminescenesTT01．Itwasli

6、gasedtoplasmidpQE30，andthenexpressedinEcoli．ThePlu4436waspurifiedwithNi．NTAagarose．TheoraltoxicityoftheresultedPlu4436tOtheneonateofHelicoverpaarmigera，Spodopteraexigua，SpodopteralituraandTrichoplusianiwastested．’FheresultsshowedthatthePlu4436havenooraltoxicitytoallofthe

7、insectstested．Keyword：entomopathOgenicnematodes，symbioticbacteria，plu4436gent，cloneandexpression11石微中山大学硕士学位论文日IJ舌昆虫病原线虫．共生菌复合体由于具有杀虫谱广、主动搜索害虫的能力，已成为生物防治的方法之一。现已描述的共生菌有两个属：致病杆菌属(Xenorhabdus)和发光杆菌属(Photorhabdus)。当线虫主动侵染昆虫后，其肠道中的共生菌被释放入昆虫血腔，共生菌在血腔中大量繁殖，释放毒素，导致昆虫迅速死亡(ffrenc

8、h．Constantetal．，2002)。由于发光杆菌属和致病杆菌属共生菌不能在土壤或水中长时间生存，所以它们不能直接作为生物杀虫剂使用，但是可以将它们的毒素基因转入其他细菌、微生物或植物中开发利用。近年