不同基因型悬铃木的离体培养与遗传转化研究论文

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1、不同基因型悬铃木的离体培养及遗传转化研究摘要二球悬铃木在我国是一种重要的园林绿化树种，具有良好的杂种优势。但是在4、5月份花粉、种毛随处飘落，不仅污染环境，还会严重影响人们生活。为解决这一问题，许多科研工作者在改进栽培管理措施、选育少果品系、化学或物理诱变等方面做了许多研究，但是都不能从根本上解决问题。通过组织培养和基因工程进行遗传改良是一种更加有效的育种手段。悬铃木研究的最终目的是培育不育的新品种，这一目标要通过转化不育基因来实现。进行遗传转化需要首先建立稳定的快繁体系和高频的植株再生体系。本研究中取不同基因型悬铃木的外植体培养，结合实验室保存的无菌材料，建立新的快繁体系和叶片再生体系，并优

2、化已有的悬铃木转化体系，尝试将早花基因PtLFY转入悬铃木中。另外，对实验室保存的抗性植株进行增殖培养、PCR检测和练苗移栽。主要研究结果如下：1．取PE、P19、四倍体的柄下芽进行消毒培养，结果表明取秋季的柄下芽或春季新萌发的枝条中部的4．6个芽培养萌芽率较高。升汞消毒最佳时间为8min(11月)或12min(4月)，在启动培养基MS+6．BA0．3mg／L+NAA0．05mg／L上，P19的柄下芽萌芽率最高；PE的萌芽率为33．3％；四倍体柄下芽的诱导最难，萌芽率只有13．3％。P19柄下芽诱导的最佳培养基是MS+6．BA0．3mg／L+NAAO．05mg／L。2．在培养基MS+6．BA0

3、．3mg／L+NAA0．05mg／L上，PH2的增殖系数最高3．9，P19其次为2．5，PE仅为1．6。对PH2来说，基本培养基MS和WPM对试管苗增殖的影响不大，1／2MS不适合增殖。以MS为基本培养基时，PH2增殖的最佳激素组合是6-BA0．6mg／L，P19增殖的最佳组合是6-BA0．6mg／L+NAAO．05mg／L。3．在相同培养基MS+IBA0．1mg／L上，PH2不定根数最多，多达7．0根，主根较粗、侧根发达；PE不定根数量较少、较短，每株平均4．2根；P19平均根数为6．4。对PI-12来说，MS、WPM、1／4MS不适合生根，1／2MS是最佳的基本生根培养基；以1／2MS为基

4、本培养基时，0．Img／LIBA的生根效果最好。华中农业大学2009届硕士学位论文4．在培养基MS+BA6．0mg／L+IBA0．5mg／L上，PH2叶片再生率为44％，P19仅为12％。PH2叶片再生的最佳激素组合为MS+BA4．0mg／L+IBA1．0mg／L，P19叶片再生的最佳激素组合是MS+BA6．0mg／L+IBA0．5mg／L。先经过7d的暗培养再转入光照下培养，对PH2叶片不定芽的分化有促进作用。5．在PtLFY的转化中，优化了根癌农杆菌介导的以悬铃木叶片为受体的转化体系，结果发现EHAl05是较适合悬铃木叶片转化的菌株；生根培养40d．50d的植株叶片最适合浸染；用O．4mo

5、l／L的甘露醇溶液预处理叶片5h对叶片伤害小且能促进转化；延迟选择是悬铃木叶片转化中较合适的选择方式。通过优化后的遗传转化体系，共得到抗性芽5个，在增殖培养中玻璃化死亡。6．实验室保存的抗性植株在一年继代培养后，经PCR检测7个株系全部为阳性；继代两年后，经PCR检测7个株系依然为阳性。7．取生根40．50d的、根数较多、植株强壮的试管苗移栽成活率最高，两种抗性植株、P19、PH2经练苗10d移栽最好，最佳移栽基质为腐殖土：珍珠岩：河沙(1：l：1)。普通试管苗PH2和P19的移栽成活率明显高于两种抗性苗。关键词：二球悬铃木，基因型，柄下芽，再生，遗传转化n不同基因型悬铃木的离体培养及遗传转化

6、研究InvitrocultureandgenetictransformationofdifferentgenotypesofPlatanusacerifoliaAbstractLondonPlanetree(Platanusacerifoliamttd．)isallimportantlandscapetreeusedforimprovingcityenvironmentinChinaandhasfavourableheterosis．However,inApriltoMay，pollenandseedhairsdisperse、析dely，inadditiontopollutingtheenv

7、ironmentbutalsoseriousaffecthumanhealth．Tosolvethisproblem，manyresearcherstrytoimprovethemeasuresofcultivationandmanagement，orUSechemicalorphysicalmutagenesis，buthavenotyetresovedtheproblemcompletely．