利用生物工程技术培育高羊茅耐盐耐旱新品系

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1、山东大学硬士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导卜，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内样外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以I蝈确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任出本人承担。论文作者签名：采疵彩日期：关于学位论文使用授权的声明本人完全r解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，I司意学校保阿或向国家有关部I’J或机构迸交论文的复印件和电予版，允计论文被侮阅和借阅；木人授权山东大学可以

2、将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行枪索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位沦文。(保密论文在解密后应遵守此规定)⋯一：蚴粥名：越隰刊lI东大学颈士学位沦文利用生物工程技术培育高羊茅耐盐耐旱新品系摘要高羊茅(FescuearundinaceaSchreb．)是广泛种植的多年小、开放授粉的优良草坪草兼牧草，具有色美、抗寒、耐荫、耐修剪等优点，存我同北方地区多被用于建造草坪，但其叶片粗糙、生跃缓慢、耐盐性差及易受杂草危害等缺点限制了它的进一步推广。开放授粉采用常规育种技术对高羊茅进行利

3、t质改良刁i仪削朋长、成效低，而且缺乏必要的遗传背景知识。植物细胞J二程和丛网I：程技术的发展为改良高羊茅的耐盐性及耐早性提供了一条新途径。本工作以高羊茅无菌种予苗茎尖为材料，在附加适：茂浓度6-BA鼐j2,4一D的培养基上诱导丛生芽发生并继代培养，建立起高效的丛，扛芽离体培养体系。以丛生芽芽尖为受体，利用根瘤农杆菌(菌株LBA4404，携带mini—Ti质棺pCAMBIAl300．PIS-als)介导法将来源于玉米的JP岱丛Ⅲ转入高羊茅，获得抗{，I：芽。抗性芽频率约为23．7％。抗性芽经增殖后，转移到牛根

4、培养J,VI-：根，移段化盆成活率达到95％以上。对转化植株DNA进行PCR和PCR．Southernblotting榆测，证实P腰基因已转入3个高羊茅品种中。对转化参数进行了优化，发现芽尖在OD6,oo=0．8．1．2的农杆菌菌液巾浸染5分种，结合负jK(O，5×105pa)处理，然后共培养2天，经抑菌和绿黄隆筛选后获得抗性芽频率较高。本实验室以继代培养的丛生芽块为材料，经过连续加盐筛选、后代选育，获得了一批耐盐株系。本工作对部分耐盐株系进行了耐盐酣旱堂J：分析。移域到沙盆巾的材料经-'lq司浓度盐水浇灌后

5、，随NaCI浓度的提高，利料的增殖能力逐渐减弱，脯氨酸含量提高。与对照相比，株系L53和L98分蘖增殖能力受盐胁迫影响较小。对移栽到上盆q1的材料进行干旱胁迫，并在胁迫一i尉时M取材测定牛理指标，发现与对照相比，株系L53、Q71和L98叶片细胞膜受到的损伤程度较轻，叶绿素含量降低的速度较慢，表现Ⅱ}较对照好的耐早性，其它多项牛理指标也支持了上述结论。可见，株系1．53和L98耐盐耐早性比较好，可干1；为进+步选育耐盐耐旱高羊茅新品种的候选材料。另外对已获得的转betA的高羊茅株系进行了耐盐耐早性分析。以两个

6、，占川型各三个转基因株系和对照为材料，盐处理时，逐渐增加盐浓度，达到终浓度后【Il东大学硕士学位论文维持终浓度20天左右，选取不同时间点取材测生理指标。干甲处现时，维持刈。材料适度胁迫即植株上午10时左右出现萎蔫，下午浇适龄水后第。一：天早晨植株恢复正常，在胁迫不同时间点取材测定生理指标。通过分析转基W材料的乍物}连、叶绿素含量、脯氨酸含量、质膜稳定性等指标，可以看Ⅲ转箍川耵!i株l：LX,J照具仃更好的耐盐耐旱性。早胁迫下转基因植株甜菜碱的积累黾漫著高十刈照植株，表明betA转入高羊茅可提高细胞内甜菜碱的积

7、累从而提高材料的酬盐耐甲恍。这些耐盐耐早性优异的转基因材料为耐盐耐早高羊茅新品利一的堵育提供_『材料，可望在滨海盐碱地的开发与城市节水绿化方面发挥晕要作用。关键词：高羊茅；芽尖；beta：PIS；农杆菌介导的遗传转化；i6i=l早性；耐盐他2乐大学硕

8、二学位论文Breedingofdrought-andsalt—tolerantlinesbybioengineeringtechiniquesintallfescue(FestucaarundinaceaSchreb．)ABSTRACTSTaLlrescue(F

9、estucaarundinaceaSchreb．)isallopen—pollinated，perennialcool—seasongrassspecieswidelyusedforforageandturf．InnorthernChina，itiswidelymaintainedonlawns，parks，pubficgroundsandsoon，forthecharactersofbeautif