二十五味珊瑚丸治疗偏头痛的主要作用机制研究 (1)

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1、IllllllllllllllllJMlUllllllllLIIIIllY2406429硕士学位论文二十五味珊瑚丸治疗偏头痛的主要作用机制研究硕士研究生：杜文兵指导教师：黄福开教授邵杰副主任医师原林教授研究背景：摘要偏头痛(migraine)是一种发作性、搏动样、多为偏侧、中重度原发性头痛，常伴有恶心、呕吐、畏光、畏声及视觉、感觉、言语、运动缺损或刺激症状，是临床常见的慢性神经血管性疾患之一。世界各国报道的偏头痛的年患病率不同，女性大致为3．3％～32．6％，男性大致为0．7％～16．1％⋯。它发

2、作频繁，严重影响患者的身心健康、日常生活和工作学习乜1；耗资巨大，给国家和患者带来沉重的经济负担口3。世界卫生组织(wHO)发布的2001年世界卫生报告将常见疾病按健康寿命损失年进行排列，偏头痛位列第19位，并将严重偏头痛定为最致残的慢性疾病，类同于痴呆、四肢瘫痪和严重精神病H1。藏医学是中华民族医学的瑰宝之一，几千年来经过无数藏医药学家医疗实践经验的积累和升华，逐渐形成了一套独特的诊疗偏头痛的理论体系。二十五味珊瑚丸治疗偏头痛，临床经验丰富，治疗效果确切，非常值得推广与应用。但是，目前二十五味珊

3、瑚丸治疗偏头痛的研究工作主要集中在临床领域，基础研究基本处于空白状态，尤其是现代药理药效学研究完全没有开展；同时，偏头痛的现代医学发病机制尚不清楚，各种学说都存在不同程度的局限性，仅能从某一方面对偏头痛的发病机制进行阐释。因此，为了探索二十五味珊瑚丸治疗偏头痛的机制，深入挖掘二十五味珊瑚丸治疗偏头痛的优势，积极开展本项研究工作迫在眉睫，势在必行。摘要研究方法：1．二十五味珊瑚丸对小鼠中枢性疼痛的影响SPF级昆明小鼠80只，雌性，于热盘痛觉测试仪上记录每只小鼠首次舔后足或跳跃时间(秒)，凡首次舔后足

4、或跳跃时间小于5秒、大于30秒者弃之不用。筛选合格小鼠64只，随机等分为8组，各组分别为空白组，二十五味珊瑚丸低剂量组、中剂量组、高剂量组，正天丸组，盐酸氟桂利嗪胶囊组，二十五味珊瑚丸加正天丸组和二十五昧珊瑚丸加盐酸氟桂利嗪胶囊组。空白组每天生理盐水灌胃1次，给药组每天灌胃给药1次，连续灌胃10天。分别于末次灌胃后1小时、2小时在热盘痛觉测试仪上记录每只小鼠首次舔后足或跳跃时间(秒)。若时间超过60秒，即停止测试而按60秒计。2．二十五味珊瑚丸对小鼠外周性疼痛的影响SPF级昆明小鼠80只，雌雄各半

5、，随机等分为8组，分组情况同二十五味珊瑚丸对小鼠中枢性疼痛的影响。空白组每天生理盐水灌胃1次，给药组每天灌胃给药1次，连续灌胃10天。于末次给药后1小时，按0．1m1／109的剂量给每只小鼠腹腔注射0．6％冰醋酸溶液。记录15min内每只小鼠扭体反应的次数及首次出现时间。3．二十五味珊瑚丸对偏头痛大鼠血浆中NO、NOS、M92+和ET的影响SPF级SD大鼠54只，雌雄各半，随机等分为9组，各组分别为空白组，模型组，二十五味珊瑚丸低剂量组、中剂量组、高剂量组，正天丸组，盐酸氟桂利嗪胶囊组，二十五味珊

6、瑚丸加正天丸组和二十五味珊瑚丸加盐酸氟桂利嗪胶囊组。空白组和模型组每天生理盐水灌胃1次，给药组每天灌胃给药1次，连续灌胃10天。于末次灌胃后0．5小时，空白组皮下注射等量生理盐水，其余各组按lOmg／kg的剂量皮下注射硝酸甘油注射液复制偏头痛大鼠模型，观察大鼠的外观行为变化。于末次灌胃后4小时，各组大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液麻醉，用真空采血管采集腹主动脉血，混匀，离心，分离血浆，保存于冰箱中备用。采用硝酸还原酶法检测血浆中的N0和NOS，分光光度法检测血浆中的M92+，硕士学位论文酶联免疫吸附

7、法检测血浆中的ET。4．二十五味珊瑚丸对偏头痛大鼠中脑和下丘脑中c-Fos蛋白的影响SPF级SD大鼠54只，雌雄各半，随机等分为9组，分组情况同二十五味珊瑚丸对偏头痛大鼠血浆中NO、NOS、M92+和ET的影响。空白组和模型组每天生理盐水灌胃1次，给药组每天灌胃给药1次，连续灌胃10天。于末次灌胃后0．5小时，空白组皮下注射等量生理盐水，其余各组按lOmg／kg的剂量皮下注射硝酸甘油注射液复制偏头痛大鼠模型，观察大鼠的外观行为变化。于末次灌胃后4小时，各组大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液麻醉。使用含

8、4％多聚甲醛的PBS将大鼠经心脏灌注固定，完整取出大鼠脑组织，投入含4％多聚甲醛的PBS继续固定24～48h，然后取出大鼠中脑及下丘脑组织，做4um石蜡切片，保存备用。采用HE染色观察组织结构是否被破坏，采用免疫组化法检测中脑和下丘脑中的c—Fos蛋白。5．统计学处理实验数据采用SPSSl7．0统计软件分析，检验结果以均数±标准差(又±S)表示。各组数据间的两两比较采用单因素方差分析，如果方差齐性，则采用LSD检验，如果方差不齐，则采用DunnettT3检验，检验的显著性水准取P=