含sv40tag成神经管细胞瘤细胞原代培养及移植瘤模型建立的研究 (1)

《含sv40tag成神经管细胞瘤细胞原代培养及移植瘤模型建立的研究 (1)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要表达SV40Tag转基N4,鼠成神经管细胞瘤细胞原代培养及移植瘤模型的建立研究生：陈海霞导师：张雨梅副教授李厚达教授成神经管细胞瘤是一种小脑神经外胚层肿瘤，是最常见的儿童中枢神经系统肿瘤，发病率约占儿童脑肿瘤的25％，死亡率排在肿瘤疾病之首。SimianVirus40(SV40)属于多瘤病毒(polyomavirus)属，其早期基因编码产物大T抗原(SV40Tag)具有致癌性。流行病学发现在人的脑肿瘤组织中能检测到SV40病毒基因组序列。目前对SV40在肿瘤发生过程中所扮演的具体角色和确切机制

2、还不十分清楚。本实验室已经成功构建了pTet—Oll、pTRE2一SV40Tag转基因小鼠脑肿瘤模型，并对该模型的肿瘤类型进行鉴定，证实为小鼠成神经管细胞瘤。本研究中，我们对转基因鼠的成神经管细胞瘤进行了肿瘤细胞的原代培养，传代培养后，再进行克隆化培养，以建成稳定的细胞系。选择临床常用的几种抗癌药，利用细胞培养法进行体外抗肿瘤药物的筛选，通过MTT法检测，结果显示丝裂霉素对其有一定的抑制效应。利用培养的肿瘤细胞，皮下移植裸鼠，并成功发瘤。取肿瘤组织切片，进行组织病理学分析，并与转基因鼠的脑肿瘤组织比较

3、，结果显示肿瘤组织形态未发生改变。提取其RNA，经RT-PCR能检测到目的片段：采用免疫组化和WesternBlotting进一步验证，结果表明肿瘤组织仍表达SV40Tag。综上，本研究对pTet-on、pTRE2-SV40Tag转基因小鼠成神经管细胞瘤模型，进行了肿瘤细胞的原代培养，传代培养后建成稳定的细胞系，为SV40Tag的后续研究奠定了良好的基础。利用肿瘤细胞皮下移植裸鼠，成功建立裸鼠成神经管细胞瘤移植瘤模型，这将为最终在原FVB品系上建成稳定的移植瘤模型、研究肿瘤的发病机制及临床抗肿瘤药物的

4、筛选等提供宝贵的模型资源。关键词：成神经管细胞瘤；SV40Tag：原代培养；移植瘤ABSTRACTPrimaryCellCultureandTransplantableTumorModelPreparationofmedulloblastomawithSV40Tag～皿candidate：HaixiaChenSupervisor：YumeiZhangHoudaLiMedulloblastoma,themostcommonbraintumorinchildren，isakindofprimitivene

5、uroectodermaltumor(PNETs)ofcerebellumandaccountforapproximately25％ofallthetumorsinCNSofchildhood．Itisamajorcauseofbraincancermortality．SV40belongstopolyomavirus．ThecharacterofitstumorigenesisismostlyrelatedtoTantigen—earl)'protein．Epidemiologyshowsthati

6、t’SgenomicDNAsequenceCanbedetectedinhumantumor．ButthemechanismofthetumorigenesisofSV40Tagisnotclear．ThebraintumormodelofpTet-on、pTRE2一SV40Tagtransgenicmicehasbeensuccessfullyestablishedinourlab，anditwasidentifiedtobemedulloblastoma．inthisresearch，wesucc

7、essfullyoperatedtheprimarycellcultureofmedulloblastomafromtraitsgenicmicemodel．Afterhandingdownfromgenerationtogeneration，wethenculturedthemtoformmonoclonalcelllines．Next，weappliedRT-PCRtotesttheSV40Taggeneonthesecelllinesandtheresultswereallpositive．To

8、furtherconfirmthegeneexpression，weperformedinnunohistochemistry．TheresultsshowedthattheSV40Tagwashi曲lyexpressedinkaryonsofthesemonoclonalcelllines．AttheSal'netime，thecellsweretreatedwithsomeanti—tHmormedicine，whicharecommonlyused