大鼠胸主动脉平滑肌细胞内parp1在vdr转录调节中作用的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文大鼠胸主动脉平滑肌细胞内PARP-1在VDR转录调节中作用的研究硕士研究生:张莹导师:黄恺教授华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430022摘要目的：探讨大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMCs）内1型多聚ADP核糖聚合酶（PARP-1）与维生素D受体（VDR)相互作用及作用方式，以及PARP-1活性对VDR靶基因（Targetgenes）转录的影响，进而分析PARP-1活性抑制剂对大血管VSMCs增殖表型变化的影响。方法：用组织贴块法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs作为细胞基础模型，利用蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞核内PARP-1及VDR表

2、达水平；用核提取蛋白的免疫共沉淀(co-IP)，核提取蛋白及重组VDR蛋白的体外蛋白-蛋白相互作用试验(Far-WB)和多聚ADP核糖化试验探讨PARP-1与VDR的相互作用方式（蛋白之间直接结合/PAPR-1对VDR进行多聚ADP核糖化修饰）；分别给予VDR激动剂1α,25-二羟维生素D3［1α,25(OH)2D3］及不同剂量PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34处理VSMCs，利用聚合酶链式反应(PCR)检测PAPR-1活性受抑制对VDR靶基因转录水平的影响。结果：培养出大鼠胸主动脉VSMCs并能传代至15代作为研究对象。经75nM1α,25(OH)2D3处

3、理24h的VSMCs核提取物中VDR不能与PARP-1或多聚ADP核糖修饰的PARP-1结合，亦不能被PARP-1多聚ADP核糖化修饰；经同样处理的VSMCs核提取物中的VDR不能与重组PARP-1或多聚ADP核糖修饰的重组PARP-1结合，亦不能被重组PARP-1多聚ADP核糖化；重组VDR不能与重组PARP-1或多聚ADP核糖修饰的重组PARP-1结合，亦不能被重组PARP-1多聚ADP核糖化。VDR靶基因2华中科技大学硕士学位论文Cyp24a1,Vegfa,Hgf的转录水平与PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34之间没有明显的剂量相关性，但给予活性抑制剂处

4、理组的VSMCs中Vegfa和Hgf的转录水平比单独给予1α,25(OH)2D3处理组更高（P<0.05）。结论：在经75nM1α,25-二羟维生素D3处理的培养的大鼠胸主动脉VSMCs中，VDR对靶基因的转录调控不依赖于与PARP-1的直接作用或多聚ADP核糖化。抑制PARP-1活性引起的VDR靶基因Cyp24a1,Vegfa,Hgf的变化很可能由细胞核内能与VDR及PARP-1直接作用的其他转录因子调节。PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34或可促使VSMCs向增殖表型改变。关键词1型多聚ADP核糖聚合酶维生素D受体核受体蛋白相互作用血管平滑肌细胞靶基因转录

5、调节3华中科技大学硕士学位论文StudyontheRoleofPoly(ADP-ribose)polymerase-1intheTranscriptionalRegulationofVitaminDReceptorinRatThoracicAorticSmoothMuscleCellsPostgraduate:ZhangYingTutor:Prof.HuangKaiInstituteofCardiology,UnionHospital,TongjiMedicalCollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wu

6、han,430022,CRPAbstrastObjective:Toinvestigatewhetherpoly(ADP-ribose)polymerase-1interactswithvitaminDreceptorandtheinteractionmechanismsbetweenthemintheculturedratthoracicaorticsmoothmusclecells(VSMCs).Methods:Explantscultureofvasculartissuefrom2month-oldSprague-Dawleyratswasusedtoobt

7、ainprimarythoracicaorticVSMCs.Westernblotting(WB)wasusedtodetecttheproteinlevelofPARP-1andVDRinthenuclearextraofcells.Co-immunoprecipitation(co-IP),far-WBandthepoly(ADP-ribosyl)ationofnuclearextractsorrecombinantVDRproteinwereusedtostudytheinteractionmechanismsofPARP-1andVDR[whetherPA

8、RP-1i