gx50抗皮肤衰老的研究

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1、申请上海交通大学硕士研究生学位论文GX-50抗皮肤衰老的研究姓名：侯雪峰学号：1100809052导师：王朝霞专业：生物学研究方向：细胞生物学学院：生命科学技术学院上海交通大学二零一二年十二月万方数据ADissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityforMasterDegreeofPhilosophyTheAnti-skinAgingEffectofGX-50Author:XuefengHouStudentNo.:1100809052Supervisor:ZhaoxiaWa

2、ngMajor:BiologyInstitute:SchoolofLifeScienceandBiotechnologyShanghaiJiaoTongUniversity2012.12万方数据万方数据万方数据上海交通大学硕士学位论文GX-50抗皮肤衰老的研究摘要本实验室前期研究表明，源自花椒的天然活性物质GX‐50对于NF‐κB途径有抑制作用，根据文献报道，NF‐κB途径的抑制可以逆转皮肤衰老的发生,因此我们对GX‐50是否具有抗皮肤衰老的作用进行了探究。本实验室前期研究采用20月龄高龄小鼠建立自然衰老模型，在小鼠背部涂药

3、，以小鼠脊柱为对称轴，左侧涂抹GX‐50，右侧涂抹等量的PBS作为对照，应用苏木精‐伊红(HE)染色和免疫组化的方法对GX‐50的作用进行组织学观测，并采用ImageJ软件对皮肤组织免疫组化切片中胶原蛋白含量变化进行分析，实验结果提示GX‐50在组织水平可能具有有效保护小鼠皮肤、一定程度地逆转高龄小鼠皮肤衰老的发生、增加高龄小鼠皮肤胶原蛋白的表达的作用。在组织水平，本研究采用Westernblot对上述涂药小鼠实验组和对照组皮肤组织胶原蛋白含量的变化进行检测。在细胞水平，以体外原代培养的人皮肤成纤维细胞为研究对象，用过氧化氢

4、处理细胞建立人工衰老模型。采用β‐半乳糖苷酶染色法，细胞分泌物丙二醛（MDA）变化的检测和细胞胞内活性氧（ROS）含量变化的测定研究GX‐50抗皮肤细胞衰老的作用。采用Draize兔眼刺激性实验对GX‐50的刺激性进行评价。Westernblot实验结果显示，GX‐50在组织水平可以在一定程度上有效地增加胶原蛋白的表达。在细胞水平，β‐半乳糖苷酶染色实验结果显示：GX‐50预处理后过氧化氢处理组人皮肤成纤维细胞β‐半乳糖苷酶染色阳性率明显低于过氧化氢单独处理组；MDA检测结果显示：GX‐50处理组比空白组MDA分泌量下降30

5、.45%，GX‐50预处理后过氧化氢处理组比过氧化氢单独处理组MDA分泌量下降61.46%；人皮肤成纤维细胞胞内ROS荧光检测显示：GX‐50处理组比对照组荧光值下降8.03%，GX‐50预处理后过氧化氢处理组比过氧化氢单独处理组荧光值下降8.36%。根据Draize兔眼刺激性实验评价标准：GX‐50各项刺激性均为零，表明对兔眼无刺激。综上所述，GX‐50可以一定程度保护皮肤并逆转皮肤衰老的发生，且根据经典的Draize评价标准对兔眼无可见刺激性，故可能具有作为护肤品有效添加剂的应用前景。关键词：GX‐50，皮肤衰老，胶原蛋

6、白,丙二醛，活性氧I万方数据上海交通大学硕士学位论文TheAnti-skinAgingEffectofGX-50ABSTRACTGX50isaningredientofZanthoxylum，ourpreviousstudyfoundGX-50caninhibittheactivityoftranscriptionfactorNF-κB.AccordingtoreportsNF-κBmayplayaroleinregulatingagingandgeneticblockadeofNF-κBintheskinofchronol

7、ogicallyagedmicereversedtheglobalgeneexpressionprogramandtissuecharacteristicstothoseofyoungmice.ThuswedecidedtodetermineifGX-50hasantiagingeffectonskin.Inanimalstudy,theeffectsofGX50ontheskinappearanceandcollagendensityinmouseskinwereexaminedpreviousstudy.Invivo,t

8、heeffectsofGX50ontheskinofchronologicallyagedmiceweremeasured.Thecollagendensitywasdeterminedbywesternblot.Incellularlevel,weconfirmedtheanti-agi