玉米光合及产量相关性状qtl分析

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1、中文捅要利用酵母双杂交系统鉴定羽衣甘蓝ARCl与结球甘蓝SRK激酶结构域的相互作用生物化学与分子生物学专业硕士研究生张贺翠指导教师朱利泉教授；杨昆中文摘要自交不亲和性(Self-incompatibility，SI)是一种“钥匙和锁"形式防止开花植物自交的机制，研究比较深入的甘蓝等芸薹属植物的自交不亲和反应从S基因座的两个基因相互识别开始，雄性决定因子SCR(Slocuscysteine．richprotein)与雌性决定因子SRK(Slocusproteinkinase)两个因子的相互识别，相同单倍型的花粉的信号由柱头乳突细胞外传至胞内，THL与SRK相分离并释放至细胞质中，SRK的

2、激酶域随后激活ARCl(Amlrepeatcontaining)，进～步将自交不亲和信号传至EX070A1，再通过后续的级联反应，最终导致自交不亲和。本研究利用酵母双杂交系统研究甘蓝自交不亲和反应中S位点受体激酶(SRK)的激酶域与ARCl间的相互作用。以羽衣甘蓝2003a和结球甘蓝E1为材料，利用PCR技术分别分离出羽衣甘蓝的触a和结球甘蓝的舢(S位点受体激酶激酶结构域)；构建以pGBKl7为载体的ARCla、ARClb、ARClc和ARCld的重组诱饵质粒；以DGADl7为载体的SRⅪ的重组猎物载体，进行了相互作用验证，研究结果为芸薹属植物自交不亲和反应的分子机理提供新内容。1．序

3、列的克隆分析①所克隆的羽衣甘蓝彻C1的基因序列长度为1992bp且不含内含子，与已报道甘蓝的彻c1的cDNA序列具有99．7％的相似度，二者编码的蛋白质序列仅有4个位点的氨基酸差异；②所得的羽衣甘蓝的触C1基因编码的蛋白质没有信号肽，氨基酸序列存在6个磷酸化位点；；③所得的触C1基因与甘蓝型油菜4RCl的cDNA序列相似度达到99．4％，二者编码的蛋白质在一级结构上的一致性高达到92．9％，存在45个位点的氨基酸差异。④对蛋白的序列分析发现ARCl包含U_box和5个连续重复ARM两个重要的区域，经Blast与、KtorNTl分析发现：羽衣甘蓝与甘蓝型油菜U-box区存在5个位点的氨基

4、酸差异，ARM区域有14个位点的氨基酸差异。结球甘蓝的SRK激酶域与羽衣甘蓝SRK激酶域的氨基酸序列的相似性达到91．O％，376个氨基酸序列中存在46个差异氨基酸，而这46个差异氨基酸中有12个为相似性氨基酸。SRK激酶域氨基酸序列存在一个高变区，高变区位于序列第250个氨基酸与270个氨基酸之问。两南大学硕十学何论文2．酵母双杂交重组诱饵质粒的毒性及自激活检测Y2HGold【pGBKT7一ARCla】、Y2HGold【pGBKT7一ARClb】、Y2HGold【pGBlq[’7·ARClc】、Y2HGold【pGBKT7-ARCld】、Y2HGold【pGBKT7-ARCla】和Y

5、2HGold【pGBK胛1转化株在缺陷型SD卢1却平板上生长状态良好，并且菌斑大小无明显差异；由此表明构建的4组重组诱饵质粒的表达对酵母细胞无毒性作用。另外，pGBKl7．ARCl四个实验组在缺陷型SD／-唧、SD／-Trp／x—a-gal平板上均能生长、在SD／．Trp／x．a．gaVAbA平板上不生长，其中在SD／．1却／x-a-gal平板上生长的菌落无明显蓝色出现，说明四个实验组在酵母细胞中没有自激活现象。3．酵母双杂交重组猎物质粒的毒性检测将pGADT7空载和pGADT7．SRⅪ转化Y187，发现空载和重组表达载体在SD乒ku平板上生长状态良好，由此表明重组表达质粒pGADl7

6、叫讯C1成功转入酵母细胞Y187且无毒性作用。4．相互作用检测三个实验组Y2HGold【pGBKl’7-ARCl。】×Y187【pGADl7一SRⅪ】、Y2HGold【pGBKl7-ARCl。】×Y187【pGADT7一SRⅪ】、Y2HGold【pGBKT7-ARCld】×Y187fpQ∞17．SRⅪ1同时激活了4种报告基因彳职j．C、脱磁J、脚、脱；表明羽衣甘蓝ARCl与结球甘蓝的SRK激酶结构域能够发生相互作用，且互作的区域位于连续的臂重复区，其与结球甘蓝ARCl的氨基酸差异不足以引起互作区的正确构象改变。研究结果为芸薹属植物自交不亲和反应的分子机理提供新内容。关键词：自交不亲和；

7、臂重复蛋白(ARCl)；S位点受体激酶(SRK)；甘蓝；酵母双杂交U英文摘要TheInteractionsbetweentheTruncatedFragmentsofARC1fromBm嬲fc口D跆，讫cP口var．口cP矽庇口肠LandⅪnaseDomainofSRKfromBm嬲fc口D昆mcP口var．c口矽施口缸LTestedbyaYeastTwo．HybridSystemM．S．Candidate：ZhangHecuiSuperVis