透明质酸在非霍奇金淋巴瘤中的表达与对cem细胞体外增殖侵袭的影响

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1、透明质酸在非霍奇金淋巴瘤中的表达及对CEM细胞体外增殖侵袭的影响摘要目的：研究透明质酸在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义，进一步研究外源性透明质酸对CEM细胞体外增殖侵袭的影响，从而为非霍奇金淋巴瘤的预后判断、病情进展提供参考；为临床治疗非霍奇金淋巴瘤开辟新的抗癌靶点提供理论依据。方法：1.收集51例NHL患者的外周静脉血标本，分离血浆，放射免疫分析法测定血浆中透明质酸的浓度，明胶酶谱法测定血浆中基质金属蛋白酶2、9的活性。另收集15例健康人的血浆标本作为对照。2.分别用含0ug/ml、10ug/ml、20ug/ml外源性透明质酸的10%FBS的1640培养基培养CEM细胞

2、，进行下列指标的测定：⑴MTT法测不同浓度透明质酸作用CEM细胞24、48h、72h后细胞增殖能力的变化；台盼蓝拒染法计数不同浓度透明质酸作用CEM细胞24、48、72、96、120h后活细胞数，并绘制细胞生长曲线；⑵侵袭试验分析不同浓度透明质酸作用CEM细胞24小时后细胞侵袭能力的变化；⑶实时定量PCR法测不同浓度透明质酸作用CEM细胞24小时后细胞MMP2、MMP9mRNA表达的变化；⑷明胶酶谱法测定不同浓度透明质酸作用CEM细胞24小时后细胞MMP2、MMP9蛋白活性的变化。结果：1.NHL患者血浆HA表达水平：初治组、复发难治组均显著高于正常对照组（P<0.05）；

3、初治组、复发难治组均显著高于完全缓解组（P<0.05）；完全缓解组与正常对照组相比无明显差别（P>0.05）；初治组与复发难治组相比无明显差别（P>0.05）。2.初治NHL中III、IV期患者血浆中HA表达水平显著高于I、II期患者血浆中HA表达水平（P<0.05）。3.血浆中HA的表达与MMP2的表达成正相关，相关系数r1=0.678，P<0.01。血浆中HA的表达与MMP9的表达也成正相关，相关系数r2=0.654，P<0.01。4.经外源性透明质酸处理24h后，CEM细胞的增殖能力无明显增强，处理超过48h，增殖能力明显增强。5.经外源性透明质酸处理24h后，CEM

4、细胞的侵袭能力明显增强。6.经外源性透明质酸处理24h后，CEM细胞的MMP2、MMP9mRNA表达上调，MMP2、MMP9蛋白活性增强，且5呈浓度依赖性。结论：1.透明质酸在NHL患者血浆中高表达，且与NHL病情进展和临床分期有关；NHL患者血浆中透明质酸的表达与MMP2、MMP9蛋白活性的酶解量呈直线正相关关系；提示NHL患者血浆中透明质酸的高表达与NHL的侵袭转移能力有关。2.外源性透明质酸能够增强CEM细胞株体外侵袭能力，其机制可能与透明质酸能够上调CEM细胞株MMP2、MMP9mRNA表达和增强MMP2、MMP9蛋白活性有关。关键词：透明质酸非霍奇金淋巴瘤明胶酶谱

5、法6TheExpressionofHyaluronaninHumanNon-Hodgkin-LymphomaanditsEffectsonCEMCellsProliferationandInvasivenessAbstractObjective:Inthisstudy,wefirstexaminedtheexpressionandtheclinicalvalueofhyaluronaninnon-Hodgkin-Lymphoma.ThenweinvestigatedtheeffectofproliferationandinvasivenessofhyaluronanonCE

6、Mcells.ThusmayofferareferencefortheprognosticjudgementandtheclinicaldevelopmentofNHL,andprovideatheoreticalbasisfordevelopinganewanticancertargettoNHL.Methods:1.Collectingperipheralbloodsamplesof51NHLpatients,separationofplasma,usingradioimmunoassaytodetecttheconcentrationsofhyaluronicacid

7、inplasma,andusinggelatinzymographytodetecttheactivityofmatrixmetalloproteinase2,9inplasma.Anothercollectionof15healthypeopleascontrolplasmasamples.2.Using10%FBSof1640mediumwithconcentrationof0ug/ml,10ug/ml,20ug/mlexogenoushyaluronantocultureCEMcells,andthendet