海洋褐藻多糖药物的微量分析方法研究

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1、海洋褐藻多糖药物的微量分析方法研究摘要褐藻胶是由3-D．甘露糖醛酸(M)和Q．L．古罗糖醛酸(G)组成的线性嵌段化合物。抗心血管药物藻酸双酯钠(PSS)、降脂抗栓药物甘糖酯(PMS)、抗尿路结石药物古糖酯(Pas)--者分别是以褐藻胶、聚甘露糖醛酸(Ploymannuronicacid，PM)和聚古罗糖醛酸(Polyguluronicacid，PG)为主要原料经分子修饰制备的硫酸多糖药物。由于M和G为C5差向异构体，使得这三种海洋褐藻多糖药物在结构和理化性质方面都十分相似，目前的质量标准很难将三者加以

2、准确区分，而且三种药物目前缺乏一种快速简便的适合于生物体内及体外检测的方法，特别是微量的研究方法。本论文基于PSS、PMS和PGS三种海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成不同，建立了适合于三种药物微量分析的柱前衍生高效液相色谱方法和高效脉冲积分安培阴离子色谱分析方法。本论文以褐藻胶为原料，采用酸降解和乙醇．丙酮沉淀后剩余上清浓缩后得到了M和G的单糖混合品(MG)，建立了采用凝胶渗透排阻色谱法和离子交换色谱法制备M和G单糖标准品的分离条件，并获得了具有较高纯度的M和G单糖标准品。在对PSS、PMS和PGS三种海

3、洋褐藻多糖药物采用三氟乙酸(TFA)进行降解的基础上，与1．苯基．3一甲基．5一吡唑啉酮(PMP)进行衍生化反应，建立了适合于三种药物糖醛酸组成微量分析的柱前衍生高效液相色谱方法(PMP—HPLC_)。采用四因素三水平正交试验确定了采用TFA降解三种海洋褐藻多糖的最佳条件为：PSS、PMS、PGS的最适降解条件为降解温度110℃，降解时间6h，TFA浓度3mol／L；确定了与PMP反应的最适衍生条件为反应温度70℃，反应时间90rain，PMP与供试品的摩尔比为12：1，NaOH与供试品的摩尔比为2：

4、1；色谱条件为：0．1mol／L磷酸盐(pH6．7)缓冲液一乙腈(VN，82：18)，检测波长：24511111，流速：1mL／min。在此色谱条件下，M和G具有良好的分离度，测得PSS、PMS、PGS的M／G分别为2．37+0．05、6．60-圭0．22和0．22+0．03，样品的加标回收率约为97．6‰101．2％，检测限为5．2x10～nmol(1．01ng)。该方法具有良好的精密度和重现性，灵敏度高，适合于海洋褐藻多糖类药物的微量分析。本论文采用CarboPacPA20离子交换柱，以Au为工作

5、电极，A∥AgCI为参比电极，建立了三种药物采用TFA降解后，不经衍生化处理直接应用于糖醛酸组成微量分析的高效脉冲安培阴离子色谱分析方法(HPAEC．PAD)。结果表明：PSS、PMS、PGS的最适降解条件为降解温度115℃，降解时间4h，TFA浓度3mol／L；最佳色谱条件为：流动相：100mmol／LNaAe／20mmol／LNaOH，流速：0．4mL／min，柱温：20℃在此色谱条件下，M和G具有良好的分离，测得PSS、PMS、PGS的M／G分别为2．06士0．06、6．21-4-0．08和0．

6、04+0．05，样品的加标回收率为90．1‰98．0％，检测限为6．4x10-3nmol(1．25ng)。该方法具有良好的精密度和重现性，灵敏度高，样品不需衍生可直接进样等优点，同样适合于海洋褐藻多糖类药物的微量分析。本论文建立了用于三种药物糖醛酸组成微量分析的柱前衍生高效液相色谱法和高效脉冲积分安培阴离子色谱法，不仅为三种海洋褐藻多糖药物的定性、定量分析和质量控制提供了基础，同时由于生物体内不含有M和G，可以排除内源性糖醛酸的干扰，还为三种药物的体内微量分析和药代动力学研究奠定了基础。关键词：藻酸双

7、酯钠；甘糖酯；古糖酯；高效液相色谱法；高效脉冲安培阴离子色谱StudyonMicroanalysisMethodsofCompositionofMarineAlginatePolysaccharideDrugsAbstractAlginateisalinearblockcompound，whichiscomposedof13-D—marmoseuronicacid(M)anda-L—guluromcacid(G)．Anti—cardiovasculardrugsPSS，lipid—loweringdr

8、ugsPMS，anti·urolithiasisdrugsPGSarethreedrugsbasedonthesodiumalginate，ploymannuronicacidandpolyguluronicacidasthemainrawmaterialssulfatederivatives．BecauseofMandGfortheC5epimer，itmakesthesethreedrugsinthestructureandphysico-chemi