cjun对基础状态下仔猪睾丸间质细胞增殖的影响

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1、西南大学硕十学何论文捅要皇曼曼皇曼曼曼曼曼曼!曼曼曼曼曼曼曼!曼皇曼曼I一一．i；．；I篡曼曼皇曼曼曼皇笪曼蔓蔓蔓曼舅舅曼曼曼舅曼皇曼曼曼曼c-jun对基础状态下仔猪睾丸间质细胞增殖的影响临床兽医学硕士研究生姚银竹指导老师郑小波副教授摘要睾丸间质细胞是产生睾酮的主要分泌细胞，它利用多种酶将胆固醇逐步合成睾酮。其睾酮分泌作用受促性腺激素、生长因子等多种因素的调控，大量研究表明，这些因素实际上是通过调控与之有关的原癌基因表达来实现的。但无论如何，最终都要通过影响睾丸间质细胞生成睾酮的能力起作用，而这种能力包括睾丸间质细胞的数量以及单个睾丸间质

2、细胞的睾酮合成能力。细胞的数量与睾丸间质细胞的增殖、凋亡有关，单个睾丸间质细胞的睾酮合成就取决于其细胞内睾酮合成相关酶的活性。c-jan作为睾丸间质细胞睾酮分泌过程的原癌基因之一，具有促进睾酮分泌的作用。但究竟c-jun是影响睾丸间质细胞数量或者影响单个睾丸间质睾酮合成相关酶，目前还不清楚。有研究表明，c-jun对细胞增殖有正性调控作用。因此，本实验通过研究c-jan对基础状态下睾丸间质细胞增殖的影响，从而为进一步探索c-jan在睾酮分泌中的作用机制提供参考。本实验以3周龄仔猪为研究对象，采取其睾丸分离获得睾丸间质细胞，经活力、纯度和功能

3、评价后在体外进行培养，分别以0．125、0．25、0．5、1、2gmol／Lc-junASODNs处理，利用实时荧光定量PCR检测c-junASODNs对睾丸间质细胞c-junmRNA的阻断作用，MTT法检Nc-janASODNs对睾丸问质细胞生长的抑制作用，流式细胞术检Nc-junASODNs对睾丸间质细胞周期的影响，以研究c-jun对基础状态下睾丸间质细胞增殖的影响。经活力、纯度和功能评价后，选择细胞活力在95％以上、睾丸间质细胞纯度在90％以上且睾酮分泌功能良好的细胞进行体外培养。经不同浓度c-junASODNs处理后，实时荧光定量

4、PCR结果显示0．125gmol／Lc-junASODNs就能显著下调c-junmRNA的表达(萨0．01)，c-janmRNA表达量随着浓度增加而降低，但到1grnol／L后c-junmRNA表达不再减少。MTT法检测结果表明c-junAsODNs能明显抑制睾丸间质细胞的生长(p<0．0D，且浓度与生长抑制率间正相关(r--0．8966)。通过流式细胞仪检测睾丸间质细胞周期，发现0．125gmol／Le-junASODNs能显著减少进入S期的睾丸间质细胞数量(p

5、与对照组相比，Go／G1期细胞数量百分比分别增加5．78％、11．36％、16．73％、22．25％、23．36％。通过实验得出以下结论：(1)c-junASODNs能有效阻断c-junmRNA的表达。(2)c-junASODNs呈剂量依赖性抑制睾丸间质细胞的生长。(3)c-janASODNs能将睾丸间质细胞阻滞在GdGl期。关键词：C-jLIn；仔猪；睾丸间质细胞；增殖两南大学硕+学位论文ABSTRACTEffectofc-junonbasicproliferationofpiglet’sleydigll●●‘cellsinVltr0C

6、linicalVeterinaryPostgraduate：YaoYinzhuSupervisor：AssociateProf．ZhengXiaoboABSTRACTLeydigCellsarethemainexcretingcellswhichapplymultipleenzymestoproducetestosteronefromcholester01．Thetestosteronesecretionisregulatedbymanyfactors，suchaSgonadotrophins，growthfactors．Infact,s

7、everalstudiesindicatedthatthesefactorsregulatetestosteronesecretionthroughadjustingtherelatedproto-oncogenes．Anyway，it'sultimatelydecidedbythecapacityofLeydigCells’testosteronesynthesis，includingthenumberofLeydigCellsandcapacityofsinglecell．Theformerhasrelationtoprolifera

8、tionandapoptosis，thelatterisdeterminedbytheactivityoftestosteronesynthesisrelatedenzymes．Asoneof