穴位贴敷tdd药贴对哮喘豚鼠tnfα和et1含量的影响

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1、硕士学位论文穴位贴敷TDD药贴对哮喘豚鼠TNF．仅和ET-1含量的影响硕士研究生：王艳杰指导老师：王升旭教授摘要一、研究背景、目的与意义支气管哮喘(后文简称哮喘)是肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和上皮细胞等多种细胞和细胞介质参与呼吸道慢性炎症。全球约有一亿五千万N--亿人罹患哮喘，在我国，约有1500--2000万哮喘患者，且在儿童及青少年中，其发病率较成人高。特别是近20年来，哮喘发病率和死亡率持续增加，目前仍以每十年20％--一50％的比率增长，哮喘已成为仅次于癌症的世界第二大致死和伤残疾病。EO

2、S在介导气道炎症参与哮喘病发病的调节中起重要作用，是哮喘发病机制中的主要效应细胞。TNF．a是哮喘病炎症过程中重要的启动因子，它还刺激ET-1分泌增加，进一步导致平滑肌细胞增殖、成纤维细胞增殖等，可能是参与气道高反应性及气道重构的重要机制之一。ET-1作为前炎性介质可增加TNF．a等的生成，而且ET-1合成、分泌增加可能是联系哮喘气道炎症和重构的关键性环节。这三者均与哮喘气道炎症密切相关，且TNF．a与ET-1有可相互促进分泌增加的效应，并且能够影响气道高反应性。经皮治疗系统(transdermaltherapeuticsys

3、tem，TTS)，或称经皮给药系统(transdermaldeliverysystem，TDDS)，一般是指经皮肤给药而起全身治疗作用的控释剂型，即皮肤贴片。它可以不经过肝脏的“首关效应”和胃肠道的破坏，不受胃肠道酶、消化液、PH等诸多因素的影响，可提高生物利用度，提供可预定摘要的和较长的作用时间，降低药物毒性和副作用，维持稳定而持久的血药浓度，减少给药次数提高疗效。天灸又称药物灸、发泡灸，是用对皮肤有刺激性的药物，涂敷于穴位或患处，使局部充血、起泡，犹如灸疮，故名天灸。古代的天灸疗法也是通过药物经过人体体表吸收后，再刺激穴位

4、并同时作用于相关的脏腑而发挥治疗作用的，即通过药物与经络的双重作用达到治疗疾病的目的。天灸大量的实验研究已证实，天灸疗法具有调整和增强机体免疫功能的作用，主要对细胞因子、白细胞、T淋巴细胞进行调节。天灸疗法作为一种传统的中医疗法，在治疗支气管哮喘方面有较为显著的临床疗效。本课题是将经皮控释给药系统(TDD)与中国古代传统的天灸疗法相结合，在天灸原方的基础上进行剂型的改良，开发的“天灸TDD药贴"。为探讨穴位贴敷TDD药贴对哮喘豚鼠模型哮喘发作的可能干预机制，本研究应用穴位贴敷TDD药贴干预哮喘豚鼠模型，观察各组致敏豚鼠喷雾时发

5、生哮喘的潜伏期(开始喷雾至出现点头呼吸的时间)及发作时症状、轻重程度(如点头呼吸频率、幅度，抽搐，晕厥等)等情况，并主要测定卵白蛋白(OVA)致敏哮喘豚鼠血清中TNF．0【、ET．1含量和支气管及肺组织中EOS浸润计数。通过比较各组哮喘豚鼠在治疗周期结束后，血清中TNF一仅、ET．1的含量及支气管肺泡组织中EOS浸润计数情况，探究天灸TDD药贴对OVA致敏哮喘豚鼠模型的抗炎、减轻气道痉挛及降低气道高反应性等可能的作用机制，进而为天灸TDD药贴对哮喘是否具有抗炎、减轻气道痉挛及降低气道高反应性等作用的研究提供一个客观的、重复性好

6、的临床前实验室依据，并为今后TDD药贴在临床上推广应用提供理论依据。二、方法与内容1．实验动物及哮喘模型制备实验研究选择豚鼠作为实验动物。将48只豚鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、TDD药贴组和地塞米松组。用卵白蛋白致敏法制作实验性豚鼠过敏性哮喘模型。第l天以10％(10}∥100m1)卵清蛋白生理盐水溶液腹腔注射lml致敏。2．造模后诱喘及干预治疗II硕士学位论文致敏2周后，豚鼠处于致敏状态，再以1％(19／100m1)卵清蛋白生理盐水溶液超声雾化吸入，至豚鼠出现烦躁、呛咳、呼吸深快和点头运动；隔天激发1次，共两周。

7、TDD药贴组和地塞米松组豚鼠分别采用穴位贴敷TDD药贴(大椎、双肺俞、双肾俞)和腹腔注射地塞米松进行干预治疗。在每次超声雾化激发后，TDD药贴组进行穴位贴敷治疗，地塞米松组采用腹腔注射地塞米松0．5mg／kg，两组均隔天干预治疗1次，共7次。模型对照组和正常对照组不给予任何干预治疗。3．症状观察及样本制备3．1症状观察：从致敏成功后诱喘开始至动物处死前的实验期间，观察各组豚鼠喷雾时发生哮喘的潜伏期(开始喷雾至出现点头呼吸的时间)及哮喘发作时症状、轻重程度(如点头呼吸频率、幅度，抽搐，晕厥等)。3．2样本制备：在末次诱喘后2"4

8、h内，迅速断头取血，离心后取上清液，放冰箱保存待测。处死豚鼠完成取血后，立即用手术剪打开胸腔，暴露肺脏，取右侧支气管组织及Nf-J处肺组织lmmxlmm大小各4块，经10％的甲醛溶液固定，24h后常规石蜡包埋，冠状切片。4．豚鼠血清中TNF．0【、ET-1含量和支气管肺泡组织