epsteinbarr病毒在burkitt淋巴瘤细胞（raji）染色体上整合的初步的研究

《epsteinbarr病毒在burkitt淋巴瘤细胞（raji）染色体上整合的初步的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作过的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明。作者签名：——日期：——年一月一日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其他手段保

2、存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：导师日期舛缮年上月上日j，剖j本课题资助基金国家自然科学基金重点项目，项目号30330560国家自然科学基金项目，项目号30300201国家自然科学基金项目，项目号30470955中南大学博士研究生学位论文创新选题，项目号75232博士学位论文摘要Epstein—Barr病毒在Burkitt淋巴瘤细胞(Raji)染色体上整合的初步研究博士生：高建明导师：李桂源教授摘要白1964年Epstein和Barr在Burkitt淋巴瘤标本的体外传代细胞中发现Epst

3、ein—Barr病毒(EBV)以来，已有多种肿瘤被证实与EBV感染有关，其中尤以Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌与EBV的关系最为密切。在EBV溶解性感染的细胞里EBVDNA呈线状形式，而在潜伏性感染时，EBVDNA通过基因组末端连接而环化，以游离体形式存在。绝大多数Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌可检测出以游离体形式存在的EBVDNA，这代表着EBV的持续性潜伏感染。EBVDNA可整合至细胞染色体，这是EBV持续潜伏感染的另一种方式，代表了病毒一细胞相互作用的又一种机制。EBVDNA与细胞基因组DNA整合后引起细胞染色体的不稳定性

4、，整合的EBVDNA可导致一些与细胞生长、肿瘤形成有关的重要基因表达异常，促进细胞恶性转化。Raji细胞是一种Burkitt淋巴瘤细胞，由Pulvertaft于1963年建株，是研究EB病毒致癌机制最为常用的细胞系之一。每个Raji摘要细胞带有50—60拷贝的EBV基因，其中相当一部分线性整合至宿主细胞基因组。以前的许多研究强调EBV潜伏膜蛋白(LMPs)和EBV核抗原(EBNAs)的致癌功能，较少从病毒整合角度全面分析EBV的致癌机制。此外，目前对EBV整合的研究并没有找到共有的、恒定出现的与EBV整合有关的染色体异常，亦

5、没有完整地揭示Raji细胞中EBV的所有整合位点及整合规律。为观察EB病毒在Raji细胞、鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中的整合，本课题用聚合酶链反应(PCR)和Southernblot检测鼻咽癌活检组织和Raji细胞“t，的EBVDNA，并用荧光原位杂交(FISH)检测鼻咽癌患者外周『『H淋巴细胞、Raji细胞中EBVDNA整合，结合G显；特和FISH技术对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位。构建了Raji细胞、鼻咽癌组织基因组文库，并用EBVDNA探针对Raji细胞基因组文库进行了筛选。第一部分：PCR、Souther

6、nBlot检测EBVDNA方法：拙提Raji、HNEl、5-8F细胞及6例鼻咽癌活检组织基因组DNA，用PCR扩增EBVBaMHIW片段、LMPl、LMP2基因；再用SouthernBlot检测EBV在Raji细胞和鼻咽癌活检组织中的表达。结果：Raji细胞中EBVBaMHIW、LMPl、LMP2扩增均阳性，而HNEl细胞均阴性，5-8F细胞可扩增EBVBaMHIW、LMPl，但LMP2阴性。6例鼻咽癌活检组织样本中分别有6例、5例、4例扩增出EBVBamHIW、LMPl、LMP2。Raji细胞和鼻咽癌活检组织高分子量基因组

7、DNA经XhoI消化后，与同位素标记的Probe—L、ProbeR杂交，阳性片段大小均博士学位论文摘要为23kbp。结论：PCR、SouthernBlot结果均证实Raji细胞和鼻咽癌活检组织样本存在EBV。HNEI和5—8F细胞EBVDNA三个片段不能或仅能部分扩增，其可能原因之一是体外多次培养传代过程会导致EBVDNA的丢失，另一个可能的原因是EBV整合可以提高染色体的不稳定性，一旦整合位点处染色体断裂，就可导致病毒DNA和细胞染色体丢失。第二部分：Raji细胞中EBV整合的染色体定位方法：制备Raji、5-8F、鼻咽癌

8、病人外周血淋巴细胞、正常人外周血淋巴细胞中期染色体标本，以Biotin—dUTP为标记物，用随机引物标记试剂盒标记探针Probe—L，用FISH检测Raji、鼻咽癌患者外周血淋巴细胞中EBVDNA整合，再应用G显带和FISH对Raji细胞中EBV整合位点进行染色体定位。结果：在Raji细胞