浙江省两地草莓灰霉病菌对异菌脲和嘧霉胺的抗药性评价与其分子机制的研究

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1、浙江人学I魂}：学位论文摘要由灰葡萄孢菌(BotrytiscinemaPem)gl起的草莓灰霉病是草莓的最重要病害之一，一般年份造成的损失大约20％～30％，流行年份损失可达50％以上。由于缺乏抗狄霉病的种质资源，化学防治仍然是防治草莓灰霉病的主要措施之一。然而，由于灰葡萄孢菌的繁殖系数大、自发突变几率高，以及存在异核和准性生殖现象，病菌变异潜力大，在药剂持续筛选压力作用下，频率极低的抗药性突变体得以保存，其种群也不断壮大，从而导致药剂防治效果下降，甚至失效。掌握用问抗药性亚群体的频率和抗性水平，对及时调整用药策略，提高药剂防治效果、减少药剂的使用量具有较大的现实意义。此外，了解病菌抗性分

2、子机制，不仅可为建立抗药性的快速分子监测体系、检测田间抗药性种群的消长动态奠定基础，同时也可为研究丌发抗抗药性策略提供理论依据。本研究采用菌丝生长速率法测定采自浙江省建德市和杭州下沙区两个草莓主产区的98个狄葡萄孢菌(Botrytiscinemaeels．)菌株对杀菌剂异菌脲的抗性。研究结果表明建德下涯和庙头张两地区已存在抗异菌脲的菌系，抗性频率达17．5％，最高抗性菌株的抗性系数为12．32。而杭州下沙和建德的杨村桥地区则尚未发现抗性菌系。通过扩增和测序，比较研究了异菌脲敏感和抗性菌株BcOSI基因N．端氨基酸重复区段的526bp序列，结果发现，抗性菌株存在两种分子变异类型，即BcOSI

3、的365位氨基酸从异亮氨酸(11e)变为丝氨酸(ser)，369和373位同时从谷氨酸(Gln)和天冬门氨酸(Asn)变成脯氨酸(Pro)和丝氨酸(Set)，以前一个类型为主，占8个抗性菌株中的7个。以同样方法评价上述菌株中42个菌株对嘧霉胺(pyimethanil)的抗性情况．结果发现，高抗菌株占19．05％，中抗菌株占2．38％，低抗菌株占2．38％，敏感菌株占76．19％。最抗菌株JDxyl3的抗性系数高达387．3，8个高抗菌株中的7个来自建德下涯地区，由此可见建德市下涯地区存在抗嘧霉胺的狄霉菌。炭疽病是草莓上另一大病害。据文献记载引起草莓炭疽病的病菌至少有三新江人学坝J学位论文个

4、种。对来自建德市下涯和杨村桥，以及杭州下沙草莓短缩茎或匍匐茎上的44个草莓炭疽菌菌株形态学、培养性状的研究表明，病菌分生孢子大小为16～20pmx4～5um，圆柱状，直形，两端钝圆，中部含有油球；培养基上的菌落尚未见刚毛。在PDA培养基上菌落特征可分两类，其一(38个菌株)为菌落灰白色，易产孢；其二(6个菌株)则菌丝狄黑色，能分泌色素，导致培养基变黑色，很少产孢。提取所有菌株的基因组DNA，根据已经报道的针对尖孢炭疽菌(Colletotrichumacutatum)，胶孢炭疽菌(Cgloeosporioides)或草莓炭疽菌(Cfragariae)ITSl区域设计的特异性引物的CaInt-

5、2和CgInt，分别进行PCR扩增，结果发现Caht-2／ITS4引物组均不能扩增出相应的片断，而CgInt／ITS4引物组均能扩增出相应的条带，由此可见，本研究所分离到的炭疽菌均不是尖孢炭疽菌，而是属于胶胞炭疽菌或草莓炭疽菌。关键词；草莓；狄葡萄菌；抗药性；异菌脲；嘧霉胺：BcOSI基因：尖孢炭疽菌；胶孢炭疽菌浙江大学硕士学位论文AbstractThegreymoldofstrawberry，causedbyBotrytiscinemaPets．，isoneofthemostdestructivediseasesworldwide．Itinduces20％to30％yieldlossin

6、regularyearandllpto50％losswhentheconditionsfavortodiseaseprevalence．Duetothelackofthegreymold-resistantstrawberrygermplasm，chemicalcontrollingisstillthemostimportantstrategyinstrawberrygreymoldmanagement．However,thelargepopulationsandmpidpropagationeapability．together谢恤thepresenceofheterokaryosisa

7、ndparasexuality，resultinahighpotentialforgeneticallydiversepopulationsofthisfungus．Underthepersistentselectionpressureofafungicide，somemutants，presentedinverylowrate，、Ⅳitllfungicide-resistancewouldbeselected，andt