dna分析在法医学种属鉴定中的应用的研究

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1、●英文缩写AAFLPAPSBSEC册DTTEUSAGDBICZNNUM丌SPAGEPBSRAPDAmmonitunPersulfateBovinoSpongiformEncephalopathyCytochromeBDithiothreitolEnzymeLinkedImmunosorbentAssayGeneticDatabankInternationalCommissiononZoologicalNomenclatureNuclearSequencesofMitochondrialOriginPolyacrylamideGelElec血ophoresisP

2、hosphateBufferedSalineRandomAmplifiedPolymorphism过硫酸铵牛海绵状脑病细胞色素B二硫苏糖醇酶联免疫吸附试验遗传学数据库国际动物学术语命名委员会起源于线粒体的核序列聚丙烯酞胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液随机引物扩增片段长度多态性◆●RFLPSNPSSCPSTRsTEMEDTP53●其主要任务是鉴定法医学生物性检材的种属来源，确定检材是否来自人体，必要时还需要确定检材来自何种动物。种属鉴定采用的方法主要有三类，即形态学方法、血清学方法和DNA技术检测方法。与蛋白质相比，DNA分子相对稳定、特异，所以DNA分析方法有助于对微量

3、、降解和腐败检材的鉴定。利用DNA分析进行种属鉴定是目前法医学研究的热点。目的本课题旨在研究17个新的STR基因座和肿瘤抑制基因TP53第八内含子的种属特异性；建立mtDNA细胞色素b(cyt6)基因PCR—RFLP分析以及复合扩增mtDNA--HVI、}I＼『II和cytb片段进行法医学种属鉴定的方法。研究上述方法在种属鉴定中的价值和可行性。方法以人和十七种常见动物为研究对象，提取DNA定量后。(1)分别扩增17个STR基因座和TP53第八内含子，聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染检测，分析各基因座和TP53第八内含子的种属特异性。(2)扩增cytb基因，根据扩增产物

4、的有无初步区分部分动物，对于有扩增产物的动物，选择限制性内切酶(AluI)对扩增产物酶切，分析酶切产物，进行种属鉴定。(3)复合扩增mtDNh—I{VI、HvⅡ和cytb片段，PAGE、银染显色后分析结果。结果(1)D9S1118和D20S604基因座对各动物DNA均无扩增产物；DXSIOI、DYS391和D20S161基因座只对猴DNA有扩增产物；D2S1774基因座对猴和鼠DNA有扩增产物；●D21S1409、DXS6809和DYS393基因座对猴、豚鼠、鼠和蛙DNA有扩增产物，对其他动物DNA无扩增产物或扩增产物在人类等位基因分型区外；DYS390、DX

5、S6789、DXS9894、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座对多种动物DNA均有扩增产物，片段多位于人类等位基因分型区内。(2)TP53第八内含子对人和猴的DNA都扩增出一条长度为460bp的片段；对其他动物虽有扩增产物，但片段长度和人有差异；鸡、狗的DNA未见扩增产物。(3)扩增cytb基因在牛、猪、羊、猫、猴、兔、豚鼠、鼠、鳝及人mtDNA检出981bp扩增产物；对狗mtDNA有微弱的非特异性扩增产物：对鸡、蛙、鸭、鱼和马mtDNA无扩增产物。经AluI消化后，牛和猪的扩增产物产生三条带；羊的扩增产物小

6、部分被酶切；猫的扩增产物原981bp片段被完全酶切，获得一条约600bp的片段；猴的扩增产物原981bp片段被完全酶切，获得一条约800bp的片段；兔的原981bp片段被完全酶切，获得一条约900bp的片段；豚鼠原981bp片段未被完全酶切，但获得较多小的片段；鼠的原981bp片段被完全酶切，获得两条约400bp和550bp的片段；鳝及人的扩增产物无明显变化。(4)复合扩增mtDNA--HVI、HvⅡ和cytb片段在人mtDNA表现为278bp、425bp、358bp三条带，动物为一条带，在电泳谱中位置与人358bp的条带存在差异。结论(1)D9SIll8和D

7、20S604基因座种属特异性好；DXSIOI、DYS391、D20S161、D2S1774、D21S1409、DXS6809和DYS393基因座对少数动物有扩增产物，扩增产物多位于人等位基因分型区外，种属特异性较好，法医学实践中可用于检材的种属来源分析；DXS9894、DYS390、DXS6789、DIS2142、DIOS2325、DIS2134、D20S601和D2S2944基因座种属特异性差。(2)扩增cytb基因，根据扩增产物的有无可初步鉴定检材的种属来源。用A1uI酶切扩增产物，如原981bp片段被完全酶切，可以认定检材为非人类来源，而且，根据酶切产物

8、的数量及大小，可进一步分析检材的具体种