豹皮樟化学成分分离与其体外抗炎免疫活性筛选的研究

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1、安徽医科大学硕士学位论文豹皮樟化学成分分离及其体外抗炎免疫活性筛选研究研究生唐敏芳导师李俊教授(安徽医科大学药学院，合肥，230032)摘要豹皮樟是樟科木姜子属毛豹皮樟（LitseacoreanaL.）的叶，又称老鹰茶。近年来药理学研究表明豹皮樟具有抗氧化、降糖、降脂、抗炎及免疫调节等功效。化学研究表明豹皮樟含有黄酮、皂苷、有机酸、香豆素和鞣质等成分，其中黄酮类成分含量高，且是其活性主要成分。我们曾经对豹皮樟的正丁醇部分进行化学成分研究，分离得到槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、

2、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷四个黄酮醇苷类化合物。本文继续对豹皮樟乙酸乙酯萃取部分的化学成分进行分离、纯化和结构鉴定；对分离得到的黄酮及其苷类化合物单体进行初步的抗炎免疫活性筛选研究。1．豹皮樟化学成分的提取分离与结构鉴定豹皮樟叶10kg，以10倍量体积分数70%乙醇回流提取3次，时间分别为2、1、1h。过滤，合并滤液，减压回收乙醇，得到总浸膏。浸膏用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯部分760g。将该萃取物用硅胶柱反复分离，硅胶柱用不同比例的石油醚-乙酸

3、乙酯和氯仿-甲醇洗脱系统梯度洗脱，最后用SephadexLH-20柱色谱纯化，经重结晶得到3个黄酮类化合物和2个甾醇类化合物。对所分离的五个单体成分，经理化反应和薄层层析鉴定、紫外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱解析，已鉴定确定结构的化合物为：槲皮素、山柰酚、(+)-儿茶素、β-谷甾醇、胡萝卜苷。3安徽医科大学硕士学位论文2．黄酮类化合物单体体外抗炎免疫活性筛选本实验意在观察黄酮类化合物结构与免疫调节活性之间的构效关系。选择健康♂SD大鼠，采用弗氏完全佐剂(freund’scompleteadjuvant，

4、FCA)诱导AA大鼠模型。d28处死大鼠，取AA大鼠的免疫细胞(脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞)体外给药培养并检测一些免疫指标：酶联免疫吸附法测定IL-1、PGE2的分泌水平；放免法检测IL-2、TNF-α水平，对所选择的5种天然黄酮类化合物的抗炎免疫活性作了初步的筛选。发现5种化合物均有免疫调节作用，同时，由于化合物间构效关系的差异，如：酚-OH数目、糖苷键的类型等，使化合物的免疫调节活性存在差异，通过半数抑制浓度(50%concentrationofinhibition，IC50)的计算，推断其强弱顺序为：山奈酚-

5、3-O-β-D-葡萄糖>山奈酚>槲皮素>山奈酚-3-O-β-D-半乳糖>槲皮素-3-O-β-D-半乳糖。关键词豹皮樟；佐剂性关节炎；免疫调节；山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖；山奈酚；槲皮素；山奈酚-3-O-β-D-半乳糖；槲皮素-3-O-β-D-半乳糖4安徽医科大学硕士学位论文StudyontheChemicalConstituentsandAnti-inflammatoryandImmunomodulatoryActivityinvitroofLitseaCoreanaL.PH.Mcandidate：TangM

6、infangSupervisor：ProfessorLiJunSchoolofPharmacy,AnhuiMedicalUniversity,HeFei,230032AbstractLaoyingteaisleafofLitseaCoreanalevelwhichhasbeenusedasateainGuizhou,SichuanandsouthofAnhuiprovinceinChina.IthasbeenreportedthattheextractfromtheleavesofLitseaCoreanaL.e

7、xertsvariouspharmacologicaleffectsincludingantioxygen,antihyperlipidemic,antihypertensive,anti-inflammatoryandimmunomod-ulation.Itcontainsmanychemicalcompositions,suchasflavonoidglycoside,saponin,organicacid,cumoric,anhydrideandtanninetal.Totalflavonoidsisthe

8、effectivecomponentintheextractfromleavesofLitseaCoreanaL.Wehadstudiedonthechemicalconstituentsofn-butanolextractobtainedfromleavesofLitseacoreanaL.andobtionedfourcompoundswhichwereaccredi