基于1hnmr技术的疲劳型亚健康肾阳虚证血浆代谢组学研究

《基于1hnmr技术的疲劳型亚健康肾阳虚证血浆代谢组学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中华中医药学会亚健康分会换届选举会议暨第四次“治未病”及亚健康防治论坛论文集实验组。根据亚健康状态的定义，参考中华中医药学会亚健康专业委员会制定的《亚健康中医临床指南》判断为疲劳型亚健康状态153。再根据1986年全国虚证与老年病会议制定的《中医虚证辨证参考标准》确诊为肾阳虚证【6J。选择同龄的健康人作为正常对照组。2．1．1疲劳型亚健康的判定标准参照中华中医药学会《亚健康中医临床指南》【l】中关于亚健康的判定标准：①持续3个月以上反复出现的不适状态或适应能力显着减退，但能维持正常工作；②尽管具有明确的疾病诊断，但与目前不适状态或适应能力的减退无因果联系；③《个人疲劳强度问卷》(Checkli

2、stIndividualStrength，CIS)疲劳评分CIS得分耋60分。2．1．2肾阳虚证辨证标准参照1986年全国中西医结合学会虚证与老年病专业委员会修订的《中医虚证辨证参考标准》与2002年《中药新药临床研究指导原则》中关于肾虚证的诊断标准：①主症：腰膝酸软，性欲减退，畏寒肢冷。②次症：精神萎靡，夜尿频多，下肢浮肿，动则气促，发槁齿摇，舌质淡苔白，脉沉迟，尺无力。⑨诊断：主症具备2项，次症至少具备2项以上者即可确诊。2．1．3纳入与排除标准纳入标准：①判断为皿健康状态；②符合肾阳虚证辨证标准；同时具备①②即可作为纳入病例。自愿接受调查并签署知情同意书。排除标准：①处于心脑血管疾病、糖

3、尿病、肿瘤等重大疾病治疗用药期；②患非重大疾病但需用药维持者：③感染、外伤的患者；④妊娠及哺乳期妇女；⑤有精神疾病史或精神疾病家族史。2．2样本采集及处理所有患者以及正常人均签署同意书，样本收集前一天要求食用清淡饮食，避免海鲜以及辛辣食物，并禁止饮酒与吸烟。采集早餐前空腹血液，血液收集于肝素钠溶液抗凝预处理后的离心管中，混匀，4"12，1000xg离心10min，吸取上层血浆，置．80"C冰箱保存，用于1H．NMR检测。2．31H—NMR实验．将血浆取出室温下解冻，向编号后EP管中分别依次加入300止血浆、3009L重水配置的TSP(2mg／mL)，充分震荡混匀后4"C14000r／min，离

4、心10rain，取500gL上清加入核磁共振管(O=5mm)中待用。所有1H．NMR谱都在BrukerUltraShieldTM600MHz核磁共振仪用5mmPATXI反向探头检测，对应的质子共振频率599．90MHz，采用CPMG(Can'-Purcell．Meiboom．Gill)脉冲序列fRD．900吒．180。-2"c-1800-2"c-1800-⋯-ACQ)观察小分子信号，CPMG参数如下：谱宽8000l-Iz，累积扫描64次，采样点64k，采样时间5s，弛豫延迟6s，自旋回波时间0．32s，线增宽因子1，实验温度298k。在弛豫延迟期间采用预饱和照射压制水峰。2．4数据处理及多元数

5、据分析自由感应衰减信号(FID)经过傅立叶转换后为一维NMR谱图，利用MestReNova5．3．1软件(MestreLabResearchSL，Spain)对所有1H—NMR谱进行相位矫正和基线矫正，以TSP为化学位移参考峰的位置，设为Oppm。对60—7．95进行分段积分，积分间距△60．01ppm，每组数据都以总和为l进行归一化处理。将归一化后的积分数据以EXCEL文件保存，为消除水峰影响，去除64．5—5．25段的积分值，然后将剩余数据导入到SIMCA．P+12．0软件包(Umetrics，Sweden)进行分析。数据采用PLS．DA进行分类建立模型，结果以积分矩阵图和载荷矩阵图表示。

6、3结果3．1临床一般资料按照前述标准共收集疲劳型弧健康。肾阳虚证患者5例，其中男3例，女2例，平均年龄35岁，平均病史9．3个月；正常对照组6例，其中男4例．女2例，平均年龄33．8岁。3．2疲劳型亚健康血浆代谢组学差异表达谱3．2．1疲劳型亚健康肾阴虚证波谱图根据图l波谱图可见两组波峰水平有明显差异，提示两组代谢产物成分有明显差异。．300．中华中医药学会亚健康分会换届选举会议暨第四次“治未病”及亚健康防治论坛论文集1．“．．图1正常对照组、疲劳型亚健康肾阳虚证组血浆CPMGlH-NMR波谱图(注：C：正常对照组；YANG：疲劳型亚健康肾阳虚证组)3．2．2CMPG1H．NMR模式识别采用O

7、PLS．DA方法对两组样本建模，以“肾阳虚证”为因变量(Y)，积分值为自变量(x)，将Y值设定为O／l的矩阵(正常对照设为0，肾阴虚证设为1)，模型参数辟n787，∥Y=0．628，矿=．0．328，对应积分矩阵图(图2A)可见样品集中分布于95％可信区间，模型拟合及分类效果好，提示两组代谢谱有差异。提取V／P值选择对分类贡献较大最大的前40个变量，载荷矩阵图(图2B)提示这40个变量所代表的代谢