支气管哮喘患儿外周血白细胞介素19水平与其临床意义

《支气管哮喘患儿外周血白细胞介素19水平与其临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南通大学硕七研究生论文引言支气管哮喘(asthma)简称哮喘，是一种呼吸道慢性过敏性炎症，，：以气道慢性高反应性为主要特征。近年来，随着社会的进步、经济的、．发达，人民卫生生活水平的不断提高，呼吸道感染性疾病发病率不断下降，然而，以气道高反应性为主要特征的呼吸道慢性过敏性炎症的哮喘发病率逐年呈上升趋势，且发病年龄有向低年龄组发展趋势。哮喘的发病机理至今尚未完全清楚，导致临床上尚缺乏有效的根治手段。因此，哮喘发病的基础研究对于指导临床诊断和防治哮喘将具有十分重要的意义。。1995年WHO和NIH联合提出的《哮喘全球防治创议》将支气管哮喘定义为：是由嗜酸性粒细胞(E

2、OS)、肥大细胞(Mc)、T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的慢性气道炎症。已有大量证据表明，这些炎症细胞的激活和产生效应与多种细胞因子(cytokine，CK)如IL一2、IL一4、IL-5，IL一6，IL-IO，IL-13，INF—y，TNF—a，MCPs，RANTES、eotaxin等息息相关[1-25]o这些细胞因子可引起Thl／Th2失衡、Th2占优势，导致IgE、EOS等上升，使哮喘患者气道反应性增高，引起以气道高．反应性为主要特征的呼吸道慢性过敏性炎症。但是，目前仍有许多新发现的细胞因子如IL一18、IL一19、IL一20、IL一21(Interleuk

3、in一18、19、20、21)瞳⋯1等在哮喘发病机制的作用还不清楚。LiaoSC，ChengYC等”们人对IL-19与哮喘的关系进行了初步研究，认为IL-19可能在哮喘发病机制中发挥着重要作用。但对其在哮、喘不同时期的表达状况及意义研究很少，国际与国内未见相关的文献11夕南通大学硕士研究生论文报道。本实验旨在观察哮喘患者疾病的不同时期外周血中IL一19表达水平变化并探讨与IgE、EOS的相关关系，从而了解IL一19在哮喘病发病机制中的作用，以及检测血清IL一19水平对哮喘病诊断和预后判断的临床意义。南通大学硕士研究生论文材料与方法。1、实验分组实验设计分为三个实

4、验组：哮喘发作期组、临床症状缓解期组、正常对照组。2、研究对象哮喘患者：本研究中所有患者均为南通大学第二附属医院儿科于2004年12)弓-2005年12月收治病例，诊断符合全国儿科哮喘防治协作组1998年制定的支气管哮喘诊断标准啪3。其中，哮喘发作期组21例，男14例，女7例，年龄2—12岁，平均5．7(5．48--+2．94)岁，该组患儿在标本采集前一周未曾使用糖皮质激素治疗；临床症状缓解期组19例，男13例，女6例，年龄2—12岁，平均5．9(5．68--+2．98)岁，为哮喘急性发作后经治疗一周以上且临床症状明显缓解的患儿，均已停用糖皮质激素或减至维持量。

5、正常对照组儿童22例，男14例，女8例，年龄卜13岁，平均5．4(5．23-+3．74)岁，系南通大学第二附属医院儿科体检的健康儿童，均无湿疹、过敏性鼻炎及其他过敏性疾病史，无呼吸系统疾病史，体格检查、胸部X线均无异常。3、标本采集在无菌条件下，分别采取支气管哮喘急性发作期、临床症状缓解期及正常对照组儿童外周静脉血3ml，其中2．Oml静置至血块收缩后室温下离心3000rpm10min，分离血清于一70。C冰箱保存待测(所有标本一批次性定量测定IL-19、IgE水平)；另1．Oml外周静脉血立即送本院检验科作EOS绝对计数。13南通大学硕士研究生论文4、方法4．

6、1、细胞因子IL-19和IgE水平的检测用酶联免疫吸附试验(enzyme—linkedimmunsorbentassay，)双抗体夹心法。原理是：固相载体吸附抗体；加入待测标本(患者处理过的血清)；待其反应；加入酶标抗体；再次反应；加入底物进行呈色反应；酶标仪测定；计算结果。IL-19、IgE的ELISA检测试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供。采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(ABC-ELISA)，操作严格按试剂盒说明书进行。提前20分钟从冰箱中取出试剂盒及样品(患者处理过的血清)，以平衡至室温。用抗人IL—19单抗包被于酶标板上，标准品与样品中的IL-19与

7、单抗结合，加入生物素化的抗人IL—19抗体，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入酶底物OPD，加终止液硫酸，颜色变深，用伯乐RA500酶标仪在492nm处直接读取各样本的浓度值，同时自动绘制出标准曲线。IgE水平检测过程与方法类同IL一19。4．2、嗜酸性粒细胞的检测采用血细胞分析仪，由专职检验员进行检测。血细胞分析仪检测原理是：(1)阻抗型原理：根据血细胞非传导性的特性而设计。在设计小孔内外各有一铂电极，当测定液中细胞通过计数小孔时引起电阻突变，产生电脉冲信号，脉冲的多少及振幅与细胞数目及大小有关，传输到计数

8、系统而被显示。(2)VC