洛铂对肺癌a549细胞作用初步探讨

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1、中文摘要洛铂对肺癌A549细胞作用的初步探讨摘要目的：肺癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，己成为目前人类因肿瘤死亡的主要原因，在我国农村和城市近20年来己成为发病和死亡上升幅度最大的疾病，大多数患者就诊时己丧失了手术机会，只有少数患者能进行手术治疗，因此化学治疗在肺癌的治疗中起着非常重要的作用。顺铂(cDDP)是目前发现的抗癌活性最强的药物之一，被认为是治疗非小细胞肺癌(NSCLC)一线方案中最主要的组成部分，但由于其严重的肝肾毒性和血液系统毒性使其在临床的应用受到限制，并且存在原发和继发性耐药，因此研发高疗效低毒性的铂类制剂一直是学者们努力的方向，洛铂(Lobaplatin)化学名为l，2

2、二氨甲基一环丁烷一乳酸合铂，是继顺铂和卡铂之后的第三代铂类衍生物，其最主要的优点是治疗剂量下肾毒性和血液学毒性小及较轻的胃肠道反应，可用于乳腺癌、肺癌和慢性粒细胞白血病等的化疗治疗。细胞凋亡是细胞自然死亡的一种毛要形式，由凋亡相关基凶控制，是维持机体自身平衡的重要机制．近年研究表明，细胞凋亡受抑制参与形成肿瘤，大多数化疗药物通过诱导细胞凋亡起作用。因此对化疗药物细胞凋亡的研究具有十分重要的理论价值和临床指导作用。Bcl-2是B细胞淋巴瘤／白血病一2(B—celllymphma／1eukemia一2)的缩写。Bcl一2对细胞凋中文摘要亡有明显的抑制作用，降低bcl-2的表达有利于细胞凋亡。Bc

3、l-2表达降低参与化疗药物引起的细胞凋亡，因此对Bcl一2的研究成为肿瘤细胞凋f：研究的热点。本实验以洛铂为研究对象，以肺癌细胞株A549为模型，采用MTT比色法、流式细胞技术检测洛铂对肺癌细胞的增殖抑制、细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡等作用，应用蛋白印迹法和免疫细胞化学法分析洛铂对bcl一2蛋白表达的影响。为洛铂在肺癌化疗中的应用提供相应的理论基础和实验依据。方法：(1)取对数生长期的肺癌A549细胞进行实验，实验分组为：空白对照组(培养液)；阴性对照组(培养液+细胞)；实验组(培养液+细胞+不同浓度洛铂)；将各组分别培养24、48和72小时。(2)倒置显微镜下观察细胞生长情况及细胞形态学变化

4、。(3)应用MTT比色法检测洛铂对肺癌A549细胞增殖的影响。(4)应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率的变化和影响。(5)应用蛋白印迹法分析洛铂对Bcl-2蛋白表达的影响。(6)统计学处理：采用SPSS统计软件包进行统计学处理。结果：洛铂能抑制肺癌A549细胞的增殖；经洛铂处理A549细胞后，光镜下可见到明显的凋亡细胞；细胞周期的G1期前有低于二倍体细胞的凋亡峰；蛋白印迹检测表明洛铂可使bcl一2表达下降。(1)倒置显微镜下每天察阴性对照组、各度实验组细胞大小和形态变化。阴性对照组肺癌A549细胞呈梭形，以贴壁方式生长，细胞轮廓清晰，细胞间结构紧密，生长旺盛。浓度为2．5lamol／L矛

5、l：15lamol／L洛铂作用24h后可见少量细胞变圆、体积中文摘要增大，大部分细胞仍贴壁生长，作用48h、72h后细胞缩小变圆，部分积聚成团。10umol／L洛铂作用24h后可见变圆细胞逐渐增多，贴壁生长细胞数量减少，脱壁漂浮的小圆球细胞及细胞碎片逐渐增多，48h可见变圆细胞较前增多，贴壁生长细胞减少，漂浮的小圆球细胞和细胞碎片增多，72h后可见大部分细胞积聚成团。(2)应用MTT比色法检测洛铂在不同浓度、不同时间对肺癌A549细胞株增殖的抑制作用，A549细胞出现明显的增殖抑制，增殖抑制程度依赖于药物浓度，随浓度的升高和作用时间的延长而增大，具有呈时间和剂量依赖性。(3)洛铂对A549细

6、胞周期变化的影响：洛铂可以对肺癌A549细胞产生细胞周期阻滞。(4)洛铂对A549细胞凋亡率的影响：结果表明洛铂可以诱导肺癌细胞凋亡，而且随着药物浓度和作用时间的增加，凋亡率逐渐增加，呈时间和剂量依赖关系。(5)Western—blot检测Bcl-2蛋白的表达可见随洛铂浓度的增高，凋亡率增高，Bcl-2的表达逐渐降低。提示我们洛铂诱导的细胞凋亡与Bcl-2蛋白的表达有一定关系。结论：洛铂能显著抑制肺癌A549细胞增殖，诱导细胞凋亡和细胞周期变化，并主要通过调节bcl-2等蛋白的表达来实现。关键词：洛铂；肺癌；A549细胞；细胞周期；凋亡；Bcl一2英文摘要Theinitialapproach

7、oneffectoflobaplatininlungcancercellline．A549ABSTRACTOBJECTIVE：Lungcanceristhemostprevalentmalignanttumorsintheworldandhasbecometheleadingcauseofdeath．InChina’Sruralandurbannear20years，themorbidityandmortal