微生物实验-第五组.doc

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1、微生物實驗-第五組98023002沈師宇98023008蔡亞倫98023023房毅98023045洪偉哲實驗四–bacterialgrowth實驗目的為了瞭解細菌生長曲線之形成及代表之意義。實驗器材大腸桿菌LB溶液、LBAgar無菌水實驗方法1.將50μl稀釋後之大腸桿菌，加入LB瓶內，並取出以無菌水稀釋103倍置入cuvette測OD當blank做T02.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋104倍置入cuvette測OD做T13.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋105倍置入cuvette測OD做T24.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀

2、釋稀釋106倍置入cuvette測OD做T35.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋107倍置入cuvette測OD做T46.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋107倍置入cuvette測OD做T57.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋108倍置入cuvette測OD做T68.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋109倍置入cuvette測OD做T79.培養一小時候再取出LB瓶內溶液，並取出以無菌水稀釋稀釋109倍置入cuvette測OD做T810.記錄以上8小時的數據，並將實驗數據以時間為橫軸，吸光值、菌數對數值為縱

3、軸畫出圖表，並計算生長曲線圖。實驗結果T0T1T2T3T4T5T6T7T8時間012345678菌落數711019147255181生存曲綫03.3222592.1241751.2692450.7019090.9288640.9454980.4286140菌數1.85125811.2787541.1461280.8450981.397941.707570.903090T0T1T2T3T4T5T6T7T8時間(Hr)012345678OD值-0.0010.0030.0180.1680.5320.7930.9411.0521.126OD值00.0040.0180.1710.5330.7920.94

4、21.0521.127平均OD值-0.0010.0070.0360.3391.0651.5851.8832.1042.253討論從我們這組的生長曲線來看，可以發現到在Ｔ１時細菌大量生長，直到最後Ｔ９細菌大量死亡，ＯＤ值逐漸飆高則是表示液體內細菌的數量，但不論細菌是否存活。加上有污染的情況，所以不排除是因為菌之間互相競爭造成死亡。而污染的原因推測這可能是在種菌的時候不小心摻入的別的菌，造成從T0開始全部都有污染。實驗五–controlofbacterialgrowth實驗目的細菌由培養基吸收養料後，經過許多不同酵素的作用，可進行一連串之代謝反應，產生能量，提供細胞生長之所需，同時會有廢物的產生，

5、由醣類、脂肪與蛋白質之利用情形，可了解細菌之代謝作用。實驗器材大腸桿菌、金黃葡萄球菌、和其他菌種(P.m、E.f、S.ty、S.e等)含0.5%澱粉之營養平碟含5%葡萄糖(Glucose)、乳糖(Lactose)、蔗糖(Sucrose)等3種不同糖汁營養肉湯MR溶液：甲基紅溶液VP溶液Ｉ：α-Naphthol溶液，VP溶液II：40%KOHKovac’s試劑，革蘭氏碘液實驗方法一、澱粉水解試驗1.取含0.5%澱粉之培養盤，於底部劃分3區2.取出S.e、P.m、E.f三種細菌分別接種於三區3.於37℃培養一天後隔天取出滴上一滴格蘭氏碘液，並記錄顏色。二、醣類之發酵作用1.取試管分別含glucos

6、e、lactose、sucrose5ml培養溶液。2.接種P.m及E.f至以上3之不同醣類的試管中。3.於37℃培養至隔天，觀察氣管內空氣量並記錄。三、MR-VP試驗1.將P.m及E.f分別接種於2管MR-VP於37℃培養至隔天2.在MR管內加入甲基紅，並觀察期顏色變化3.在加入0.5ml之α-Naphthol與0.5mlKOH溶液，充分混合。4.觀察並記錄其變化情形四、蛋白質的分解1.接種E.coli、E.f至trypton內2.於37℃培養至隔天3.加入Kovac’s試劑，混和後靜置觀察顏色五、明膠分解1.接種E.coli及P.m至Gelatin內2.於37℃培養至隔天3.將試管置於冰上並

7、觀察明膠是否有凝固實驗結果實驗1-水解試驗實驗2-醣類發酵作用E.fP.mSucroseLactoseGlucose從實驗中知道：E.f會分解乳糖與葡萄糖P.m只會分解蔗糖實驗3-MethpRed/Voges-Proskauer(MR-VP試驗)實驗4-蛋白質的分解E.coli呈紅色，表示有indole的產生，trp被分解；E.f未呈現紅色，表示無indole的產生，trp沒被分解。實驗5-明膠分