SNT2852-2011-大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８５２—２０１１大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犈犿犫犲犾犾犻狊犻犪犪犾犾犻犻（犆犪犿狆犪狀犻犾犲）犛犻犿犿狅狀狊２０１１０２２５发布２０１１０７０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２８５２—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入

2、境检验检疫局、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：王英超、姚剑、封立平、魏晓棠、严进、吴兴海、余冬冬、纪瑛、张萍。Ⅰ犛犖／犜２８５２—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法１范围本标准规定了进出境植物检疫中大蒜黑腐病菌检疫鉴定方法。本标准适用于进出口大蒜、洋葱以及其他葱属中大蒜黑腐病菌的检疫和鉴定。２原理２．１分类学地位大蒜黑腐病菌［犈犿犫犲犾犾犻狊犻犪犪犾犾犻犻（Ｃａｍｐａｎｉｌｅ）Ｓｉｍｍｏｎｓ］属半知菌亚门（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ），丝孢

3、纲（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ），丝孢目（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ），暗色孢科（Ｄｅｍａｔｉａｃｅａｅ），埃里砖格孢属（犈犿犫犲犾犾犻狊犻犪）。２．２鉴定依据大蒜黑腐病菌的形态特征、生物学特性、寄主范围（参见附录Ａ）等是该病菌检疫鉴定方法的依据。３仪器３．１生物显微镜（具油镜镜头）、具透射光源的体视显微镜（最大放大倍数不低于５０Ｘ）。３．２超净工作台。３．３电子天平。３．４光照恒温培养箱。３．５高压灭菌器。３．６医用注射器（１０ｍＬ）及针头（１８号）。３．７血球计数器。４药品试剂与培养基４．１蒸馏水。４．２次氯酸

4、钠或乙醇。４．３ＰＤＡ培养基。５现场检疫５．１直观检查重点检查是否有腐烂、黑色霉状物等病害症状。５．２症状检查对百合科葱属，尤其是大蒜或洋葱，注意检查蒜瓣或洋葱上是否有形状不规则的黑色凹陷病斑，病斑表面是否有稀疏黑色霉状物，病斑下的组织是否变黑腐，症状图参见附录Ｂ。１犛犖／犜２８５２—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售６实验室检验６．１分生孢子的直接镜检观察对于有形状不规则的黑色凹陷病斑，病斑表面有稀疏黑色霉状物等症状的大蒜或洋葱，直接挑取症状上的霉状物镜检观察。６．２病菌的分离和纯化对于症状不明显的葱属植物组织

5、，选取可疑病瓣，用１％次氯酸钠或７５％乙醇表面消毒，用无菌手术解剖刀在患病蒜瓣病健交界处挑取２ｍｍ２２病健交界组织若干块，将组织置于无菌平皿中，×２ｍｍ经１％次氯酸钠或７５％乙醇处理２ｍｉｎ～３ｍｉｎ，移入无菌水中洗三次，最后接种于ＰＤＡ培养基平板上，每平板接种５点，重复接种三块平板，２５℃左右下培养５ｄ～７ｄ，获得纯培养。随后进行单孢分离，得到单孢菌株，进行形态学鉴定。６．３致病性测定按照附录Ｃ的方法进行接种试验。７鉴定特征７．１培养特征分离菌株在ＰＤＡ培养基上形成灰黑色菌落，平铺，边缘整齐，气生菌丝不发达。７．

6、２分生孢子特征分生孢子梗粗壮，屈膝状弯曲，有分枝，着生分生孢子的疤痕明显；分生孢子单生，黄褐色，多数椭圆形或近圆柱形、正直，少数弯曲呈Ｓ形或Ｙ形，具有暗褐色横隔４个～１０个，纵隔或斜隔０个～２个，隔膜较厚。孢子大小为２４μｍ～５６μｍ×１０μｍ～１７μｍ，表面光滑或微粗糙。分生孢子图参见附录Ｄ。７．３致病性测定用分离菌株接种蒜瓣。无伤接种和致伤接种均能致病，表现相同的症状。病菌自大蒜底部的茎盘侵入，蒜瓣基部首先显症。致伤接种的蒜瓣在接种２ｄ后即出现浅黄褐色水浸状病斑，４ｄ后病斑变黑色。此后病斑变黑部分向蒜瓣顶部扩展

7、，表面出现霉状物，蒜肉组织黑腐，腐烂部分逐渐深入。最后整个蒜瓣干缩直至消失殆尽。无伤接种的蒜瓣在接种３ｄ后出现相同症状。致病菌的再分离和鉴定：用接种发病的蒜瓣作常规病组织分离，获得的分离菌与原接种菌形态特征相同。８结果判定如分生孢子特征、分离物的培养特征、致病性特征及再分离菌株的形状与第７章鉴定特征吻合，鉴定为大蒜黑腐病菌。９菌种保存分离并最终鉴定为大蒜黑腐病菌的菌株应转接到试管斜面上，置于４℃左右冰箱中保存，并定期（１２０ｄ～１８０ｄ）转管，防止因斜面干燥而造成病原菌死亡。菌株至少需保存６个月。２犛犖／犜２８５２

8、—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售附录犃（资料性附录）大蒜黑腐病菌相关资料犃．１学名学名：犈犿犫犲犾犾犻狊犻犪犪犾犾犻犻（Ｃａｍｐａｎｉｌｅ）Ｅ．Ｇ．Ｓｉｍｍｏｎｓ１９７１异名：犎犲犾犿犻狀狋犺狅狊狆狅狉犻狌犿犪犾犾犻犻Ｃａｍｐａｎｉｌｅ１９２４英文名：Ｇａｒｌｉｃｂｕｌｂｃａｎｋｅｒ犃．２地理分布欧洲：英国、希腊、意大利、罗马尼亚、前南斯拉夫、保加利亚