SNT1135.6-2008马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１３５．６—２００８马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪犲狉狔狋犺狉狅狊犲狆狋犻犮犪犘犲狋犺狔犫狉犻犱犵犲２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１１３５．６—２００８前言ＳＮ／Ｔ１１３５共分为六个部分：———马铃薯癌肿病检疫鉴定方法；———马铃薯黄化矮缩病毒检疫鉴定方法；———马铃薯帚顶病毒检疫鉴定方法；———马铃薯黑粉病菌检疫鉴定方法；———马铃薯环腐病

2、菌检疫鉴定方法；———马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法。本部分是ＳＮ／Ｔ１１３５的第６部分。本部分的附录Ａ、附录Ｂ为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：曹云华、周力兵、蒋小龙、丁元明、寸东义、杜宇、刘忠善、和捷。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１１３５．６—２００８马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法１范围ＳＮ／Ｔ１１３５的本部分规定了马铃薯绯腐病菌检疫鉴定方法。本部分适用于马铃薯中绯腐病菌的检疫和鉴定。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本部

3、分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。ＳＮ／Ｔ１１３１—２００２大豆疫霉病菌鉴定方法３原理马铃薯绯腐病菌（犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪犲狉狔狋犺狉狅狊犲狆狋犻犮犪Ｐｅｔｈｙｂｒｉｄｇｅ）属真菌界（Ｆｕｎｇｉ），卵菌门（Ｏｏｍｙｃｏｔａ），腐霉目（Ｐｙｔｈｉａｌｅｓ），腐霉科（Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ），疫霉属（犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪）。该病菌是世界马铃薯种植地区一很严重的病菌，它主要以卵

4、孢子在土壤中存活，存活期至少７年，受侵染的种薯和种薯上附着的土壤是远距离传播的初侵染源。该病原菌的为害症状、孢子囊和卵孢子的形态特征是鉴定该病菌的依据。４仪器、设备４．１多功能显微镜（含照相装置、测量及显示器）。４．２体视显微镜。４．３恒温恒湿培养箱。４．４光照培养箱。４．５高压灭菌器。４．６超净工作台。４．７普通天平（感量１／１００）。４．８电子天平（感量１／１０００）。４．９干热灭菌箱。４．１０普通冰箱。４．１１－２０℃低温冰箱。４．１２培养皿（直径９ｃｍ）。４．１３三角烧瓶（１０００ｍＬ，５００ｍＬ，２５０ｍＬ，５０ｍＬ）。４．１４载玻片（２５ｍｍ×７５ｍｍ，厚０．

5、８ｍｍ）。４．１５盖玻片（１８ｍｍ×１８ｍｍ）。４．１６Ｐａｒａｆｉｌｍ膜或铝铂纸。４．１７冻存管（１．８ｍＬ，５．０ｍＬ）。５试剂５．１次氯酸钠溶液。５．２碳酸钙。１版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１１３５．６—２００８５．３琼脂粉。５．４琼脂糖。５．５匹马霉素。５．６万古霉素。５．７阿莫西林。５．８利福平。５．９制霉菌素。５．１０五氯硝基苯。６培养基６．１基础培养基黑麦番茄汁琼脂培养基、Ｖ８培养基（Ｖ８Ａ），其配制方法及步骤参见第Ａ．１章。６．２选择性培养基使用玉米琼脂粉加抗菌素培养基（Ｐ１０ＶＰ＋）或加抗菌素的黑麦番茄汁琼脂培养基，在此培养基上培养的疫霉菌

6、菌丝，再转移到Ｖ８培养基上可促进藏卵器的形成。配制方法参见第Ａ．２章。６．３液体培养基使用豌豆液体培养基，其配制方法及步骤参见第Ａ．３章。７检疫鉴定方法７．１症状检查马铃薯绯腐病菌侵染的种薯有弹力，但不软腐似海绵状。受侵染组织易被细菌性软腐病菌感染而产生软腐。块茎末端或附近出现粉红的腐烂。侵染的块茎用水清洗后，病健交界明显。切开表面暴露在空气中２０ｍｉｎ会变成粉红色，随后由于氧化而变成黑色或紫褐色。这些颜色变化也和细菌性软腐相关，但绯腐病菌常常有氨的刺激性气味。地下马铃薯组织如根，匍匐茎，块茎和茎基都会受到侵染。手压侵染块茎，有汁液流出，不能恢复到原来的形状。７．２分离方

7、法７．２．１将现场收集的土样称量，每份样１０ｇ碾碎放入５０ｍＬ的灭菌洁净烧杯中。加入适量的灭菌蒸馏水，使土壤呈饱和湿润状态，但避免出现流水，然后用ｐａｒａｆｉｌｍ膜封口保湿，也可用无色透明塑料袋保湿。并将土样置于２２℃～２６℃，光照条件下４ｄ～６ｄ。７．２．２在处理好的土壤中加入１０ｍＬ～１５ｍＬ蒸馏水，水面距土表１．０ｃｍ～１．５ｃｍ，然后可放入０．６％次氯酸钠处理过的马铃薯叶片（直径６ｍｍ）或番茄幼苗（在经过灭菌的蛭石里生长４星期）诱集。７．２．３马铃薯叶片诱集４８ｈ～７２ｈ后取出，在灭菌纸上晾干，然后在Ｐ１０ＶＰ＋或加抗