SNT2798-2011-进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法高效液相色谱法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２７９８—２０１１进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法高效液相色谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犺犲狀狅犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱２０１１０２２５发布２０１１０７０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２７９８—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提

2、出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：黄超群、谢文、陈笑梅、刘海山、史颖珠。Ⅰ犛犖／犜２７９８—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法高效液相色谱法１范围本标准规定了蜂王浆中苯酚残留量液相色谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中苯酚残留量的测定。２方法提要样品用甲醇沉淀蛋白质后，上层清液经ＨＬＢ固相萃取柱净化。用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。３试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。３．１甲醇：液相色谱纯。３．２乙腈：液相色谱纯。３．３甲醇水（１５＋８５，体积比）。３．

3、４甲醇水（１＋１，体积比）。３．５苯酚标准物质（Ｐｈｅｎｏｌ，ＣＡＳ编号１０８９５２，Ｃ６Ｈ６Ｏ）：纯度大于等于９９％。３．６苯酚标准储备液：准确称取适量的苯酚标准物质（３．５），用甲醇（３．１）配制成浓度为０．１０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液，－１８℃保存。有效期为６个月。３．７苯酚标准工作液：根据需要用甲醇＋水（３．４）溶液稀释成适当浓度的标准工作溶液，０℃～４℃保存。有效期为３个月。３．８ＨＬＢ固相萃取柱（或相当者）：５００ｍｇ，６ｍＬ。使用前用５ｍＬ甲醇１０ｍＬ水预洗并保持柱体湿润。４仪器和设备４．１高效液相色谱仪，配有荧光检测器。４．２固相萃取仪。４．３高速

4、离心机：９０００犵。４．４振荡器。５试样制备和保存取５００ｇ代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在－１８℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。１犛犖／犜２７９８—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售６测定步骤６．１提取称取试样４ｇ（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ离心管中，加入１０ｍＬ水，振荡２ｍｉｎ，再加入甲醇至２０．０ｍＬ，混匀，离心（９０００犵）５ｍｉｎ。移取上层清液１０．０ｍＬ至５０ｍＬ离心管中，加水至３０ｍＬ，待净化。６．２净化将上述提取

5、液过预先淋洗好的ＨＬＢ固相萃取柱，再用５ｍＬ１５％甲醇水（１５＋８５，体积比）溶液淋洗，在真空负压下，减压抽干，弃去全部淋出液。用４ｍＬ甲醇以１ｍＬ／ｍｉｎ的流速洗脱，收集全部洗脱液，摇匀后加入１．０ｍＬ水，混匀，氮吹至１ｍＬ～２ｍＬ，用甲醇定容至２．０ｍＬ，０．４５μｍ滤膜过滤，供液相色谱测定。６．３测定６．３．１液相色谱条件６．３．１．１色谱柱：Ｃ１８柱，５μｍ，２５０×４．６ｍｍ（内径）或相当者。６．３．１．２流动相：乙腈＋水（３０＋７０，体积比）。６．３．１．３流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。６．３．１．４检测波长：激发波长２７０ｎｍ，发射波长２９５ｎｍ。６．３．

6、１．５进样量：１００μＬ。６．３．２色谱测定根据试样溶液中苯酚含量情况，选定峰面积相近的苯酚标准工作溶液。标准工作溶液和试样溶液中苯酚的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和试样溶液等体积参插进样进行测定。在上述色谱条件下，苯酚的参考保留时间为８．３２ｍｉｎ。苯酚标准物质的色谱图参见图Ａ．１。６．４空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。７结果计算和表述蜂王浆中苯酚残留量按式（１）计算：犃·犮ｓ·犞犡＝…………………………（１）犃ｓ·犿式中：犡———试样中苯酚的残留含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犃———试样溶液中苯酚的峰面积；犮ｓ———标准工作液中

7、苯酚的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———标准工作液中苯酚的峰面积；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。２犛犖／犜２７９８—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售８测定低限和回收率８．１测定低限本方法对蜂王浆中苯酚的测定低限为０．０５０ｍｇ／ｋｇ。８．２回收率采用本法时，蜂王浆中苯酚添加浓度及平均回收率的试验数据如下：———添加量为０．０５０ｍｇ／ｋｇ时，回收率范围为７５．０％～８０．０％；———添加量为０．１００ｍｇ／ｋｇ时，回收率范围为８３．２％～９０．０％；———添加量为０．２