SNT2497.16-2010进出口危险化学品安全试验方法第16-部分：Western-Blot实验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．１６—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第１６部分：犠犲狊狋犲狉狀犅犾狅狋实验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋１６：犠犲狊狋犲狉狀犅犾狅狋２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．１６—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ

2、）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试

3、验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第

4、２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第１６部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、于艳军、赵好力宝、王华、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．１６—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第

5、１６部分：犠犲狊狋犲狉狀犅犾狅狋实验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验的术语和定义、主要试剂、试验步骤和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品安全试验ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验。２术语和定义下列术语和定义适用于本部分。２．１犠犲狊狋犲狉狀犅犾狅狋一般称为免疫着色或免疫印迹，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。２．２第一抗体犳犻狉狊狋犪狀狋

6、犻犫狅犱狔以待测蛋白质作为抗原的对应抗体。２．３第二抗体狊犲犮狅狀犱犪狀狋犻犫狅犱狔以碱性磷酸酶标记的，能够与第一抗体结合的抗体。３试剂３．１转移缓冲液称取甘氨酸２．９ｇ，Ｔｒｉｓ碱５．８ｇ，十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）０．３７ｇ，加适量水使固体溶解后，加入甲醇２００ｍＬ，补水至１０００ｍＬ。３．２１０×丽春红犛贮存液称取丽春红Ｓ２ｇ，三氯乙酸３０ｇ，磺基水杨酸３０ｇ，加水溶解，定容至１００ｍＬ，室温保存，用时稀释１０倍。３．３犜犅犛溶液称取Ｔｒｉｓ碱３ｇ、ＮａＣｌ８ｇ和０．２ｇＫＣｌ，加水溶解后，用稀盐酸调ｐＨ值至７

7、．４，定容至１０００ｍＬ，在１．０３４×１０５２）高压下蒸汽灭菌２０ｍｉｎ，室温保存。Ｐａ（１５ｌｂｆ／ｉｎ３．４犜犅犛犜溶液在ＴＢＳ中按１∶１０００加入Ｔｗｅｅｎ２０，室温保存。３．５碱性磷酸酶缓冲液１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·Ｃｌ（ｐＨ值９．５），１００ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，１００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，室温保存。３．６氮蓝四唑（犖犅犜）贮存液０．５ｇＮＢＴ溶于１０ｍＬ７０％二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）中。３．７５溴４氯３吲哚磷酸盐（犅犆犐犘）贮存液０．５ｇＢＣＩＰ溶于１０ｍＬ二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）中。１犛

8、犖／犜２４９７．１６—２０１０３．８磷酸盐缓冲液（犘犅犛）称取８ｇＮａＣｌ、０．２ｇＫＣｌ、１．４４ｇＮａ２ＨＰＯ４和０．２４ｇＫＨ２ＰＯ４，溶于８００ｍＬ蒸馏水中，用ＨＣｌ调节ｐＨ值至７．４，定容至１０００ｍＬ，１．０３４×１０５２）高压下蒸汽灭菌２０ｍｉｎ，室温保存。Ｐａ（１５ｌｂｆ／ｉｎ４试验步骤４．１聚丙烯酰胺凝胶的准备将进行完ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶