SNT2497.19-2010进出口危险化学品安全试验方法第19-部分：NorthernBlot实验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．１９—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第１９部分：犖狅狉狋犺犲狉狀犅犾狅狋实验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋１９：犜犲狊狋狅犳犖狅狉狋犺犲狉狀犅犾狅狋２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．１９—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细

2、胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第

3、１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能

4、试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第１９部分。本部分修改采用《分子克隆实验指南》第二版，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：于

5、艳军、王利兵、李晶、李学洋、赵好力宝、吕刚。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．１９—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第１９部分：犖狅狉狋犺犲狉狀犅犾狅狋实验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验的主要试剂和材料、主要仪器设备、试验步骤和结果分析。本部分适用于检测进出口危险化学品引起的基因转录异常。２术语、定义和缩略语２．１术语和定义下列术语和定义适用于本部分。２．１．１核酸探针狀狌犮犾犲

6、犻犮犪犮犻犱狆狉狅犫犲能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。２．２缩略语下列缩略语适用于本部分。２．２．１犕犗犘犛３（犖玛琳代）丙磺酸２．２．２犚犖犃核糖核酸３原理在变性条件下将待检的ＲＮＡ样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其他标记物标记的ＤＮＡ或ＲＮＡ探针进行杂交和放射自显影。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，从而显示出待检ＲＮＡ的片段及其相对大小。

7、４试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。４．１５×甲醛凝胶电泳缓冲液：０．１ｍｏｌ／ＬＭＯＰＳ（ｐＨ值７．０），４０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸钠，５ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ｐＨ值８．０）。４．２甲醛凝胶加样缓冲液：５０％甘油，１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ｐＨ值８．０），０．２５％溴酚蓝，０．２５％二甲苯青ＦＦ。４．３溴化乙锭溶液：０．５μＬ／ｍＬ，用０．１ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵配制。４．４２０×ＳＳＣ溶液：在８００ｍＬ水中溶解１７５．３ｇＮａＣｌ和８８．２ｇ柠檬酸钠，加入数滴１０ｍｏｌ／Ｌ

8、ＮａＯＨ溶液调节ｐＨ值至７．０，加水定容至１Ｌ，分装后高压灭菌。４．５２×ＳＳＣ，由２０×ＳＳＣ溶液稀释而成。４．６杂交液：５０％甲酰胺，５×ＳＳＰＥ，２×Ｄｅｎｈａｒｄｔ试剂，０．１％ＳＤＳ。５仪器设备５．１电泳仪。１犛犖／犜２４９７．１９—２０１０５．２凝胶成像系统。６试验步骤６．１甲醛琼脂糖凝胶电泳６．１．１制备凝胶：将适量琼脂糖溶于水，冷却至６０℃，加入５×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛至终液浓度分别为１×和２．２ｍｏｌ／Ｌ（将１２．３ｍ