SNT1119-2002-进出口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR方法.pdf

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1、进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR方法Identificationofbovine，sheepandgoatderivedmaterialsinimportanimalderivedfeedstuff—PCRmethodSN／T1119—2002前言本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国进出口商品检验技术研究所、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：徐宝梁、杨宝华、王静、曹际娟、薄清如。本标

2、准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。引言牛海绵状脑病、痒病均可通过食用病畜组织传播，所以含牛羊源性成分的动物源性饲料的使用，一直被认为是牛海绵状脑病、痒病得以传播的主要途径。禁止疫区含牛羊源性成分的动物源性饲料的生产、流通和使用，也就成为防止牛海绵状脑病、痒病感染、流行的主要手段。根据牛羊遗传物质的特异性，应用PCR方法，可以检测动物源性饲料中牛羊源性成分。本方法的测定低限为0.125％。1范围本标准规定了进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测的抽样、制样、PCR方法、限制性内切酶酶切反应方法。本标准适用于动物源性饲料中牛羊源性成分的定性检测。2术语、

3、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。2.1动物源性饲料animalderivedfeedstuff含有动物成分的饲料。2.2牛源性成分bovinederivedmaterial牛特异性DNA片段。2.3羊源性成分sheepandgoatderivedmaterial羊特异性DNA片段。2.4聚合酶链式反应polymerasechainreaction聚合酶链式反应，简称PCR。使用两段(20个～24个核苷酸)寡核苷酸作为反应的引物，这两段寡核苷酸引物的序列应不发生互补作用。但它们可和称为模板的待测DNA两条链上在一定的位点分别发生互补。反

4、应液由包括含有镁离子的反应缓冲液、4种单核苷酸(dNTP)、模板DNA及引物。在DNA聚合酶催化下，通过温度的变化(DNA变性、退火及延伸)而合成两个互补位点之间的DNA片断。这样的反应反复进行，使第一个循环产生的DNA片断得以扩增。经25个～30个循环，扩增倍数达10６。、2.5缩略语PCR：polymerasechainreaction，简称PCR。DNA：deoxyri60nucleicacid，脱氧核糖核酸。dNTP：deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷酸三磷酸。dATP：deoxyadenosinetri

5、phosphate，脱氧腺苷三磷酸。dCTP：deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸。dGTP：deoxyguanosinetriphosphate，脱氧鸟苷三磷酸。dTTP：deoxythymidinetriphosphate，脱氧胸苷三磷酸。dUTP：deoxyuridinetriphosphate，脱氧尿苷三磷酸。UDG：uracilDNAglycosylase，尿嘧啶DNA-糖基酶。bp：basepair，碱基对。BSA：bovineserumalbumin，牛血清白蛋白。EDTA：ethylenediaminet

6、etraaceticacid，乙二胺四乙酸。Taq：Thermusaquaticu，水生栖热菌。Tris：tris(hydroxymethyl)aminomethane，三(羟甲基)氨基甲烷。TE：Tris-CI、EDTA缓冲液。GuSCN：guanidiniumisothiocyanate，异硫氰酸胍。TritonX-100：t-octylphenoxypolyethoxyethanol，辛基苯氧基聚乙氧乙醇。3抽样和制样3.1检验批以不超过200t为一检验批，简称批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级。3.2抽样数量

7、3.2.1袋装饲料按式(1)计算抽样袋数：………………………………(1)式中：N—全批袋数；a—抽样袋数。注:a值取整数，小数部分向前进位为整数。3.2.2散装饲料根据散装单位的大小和类型，一般可从上、中、下三层的中心及四角五点抽样；或分层随机采样，取样点不少于15处。3.3抽样工具3.3.1金属单管抽样器：全长65cm～75cm，槽口长50cm～55cm，口宽lcm～1.8cm，头尖形，最大外径约2.5cm，或其他等效抽样器。3.3.2取样铲。3.3.3分样器。3.3.4样品袋t可密封。3.4抽样方法3.4.1袋装饲料将扦槽向下，从每袋一角依斜对角

8、方向插入袋内，然后将扦槽旋转向上，抽出扦样器。每袋取样量不少于500g。每批所抽取的样品总量不少于4kg。3