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《SNT1119-2002-进出口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR方法.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测方法PCR方法Identificationofbovine,sheepandgoatderivedmaterialsinimportanimalderivedfeedstuff—PCRmethodSN/T1119—2002前言本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中国进出口商品检验技术研究所、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。本标准主要起草人:徐宝梁、杨宝华、王静、曹际娟、薄清如。本标
2、准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。引言牛海绵状脑病、痒病均可通过食用病畜组织传播,所以含牛羊源性成分的动物源性饲料的使用,一直被认为是牛海绵状脑病、痒病得以传播的主要途径。禁止疫区含牛羊源性成分的动物源性饲料的生产、流通和使用,也就成为防止牛海绵状脑病、痒病感染、流行的主要手段。根据牛羊遗传物质的特异性,应用PCR方法,可以检测动物源性饲料中牛羊源性成分。本方法的测定低限为0.125%。1范围本标准规定了进口动物源性饲料中牛羊源性成分检测的抽样、制样、PCR方法、限制性内切酶酶切反应方法。本标准适用于动物源性饲料中牛羊源性成分的定性检测。2术语、
3、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。2.1动物源性饲料animalderivedfeedstuff含有动物成分的饲料。2.2牛源性成分bovinederivedmaterial牛特异性DNA片段。2.3羊源性成分sheepandgoatderivedmaterial羊特异性DNA片段。2.4聚合酶链式反应polymerasechainreaction聚合酶链式反应,简称PCR。使用两段(20个~24个核苷酸)寡核苷酸作为反应的引物,这两段寡核苷酸引物的序列应不发生互补作用。但它们可和称为模板的待测DNA两条链上在一定的位点分别发生互补。反
4、应液由包括含有镁离子的反应缓冲液、4种单核苷酸(dNTP)、模板DNA及引物。在DNA聚合酶催化下,通过温度的变化(DNA变性、退火及延伸)而合成两个互补位点之间的DNA片断。这样的反应反复进行,使第一个循环产生的DNA片断得以扩增。经25个~30个循环,扩增倍数达106。、2.5缩略语PCR:polymerasechainreaction,简称PCR。DNA:deoxyri60nucleicacid,脱氧核糖核酸。dNTP:deoxyribonucleosidetriphosphate,脱氧核苷酸三磷酸。dATP:deoxyadenosinetri
5、phosphate,脱氧腺苷三磷酸。dCTP:deoxycytidinetriphosphate,脱氧胞苷三磷酸。dGTP:deoxyguanosinetriphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。dTTP:deoxythymidinetriphosphate,脱氧胸苷三磷酸。dUTP:deoxyuridinetriphosphate,脱氧尿苷三磷酸。UDG:uracilDNAglycosylase,尿嘧啶DNA-糖基酶。bp:basepair,碱基对。BSA:bovineserumalbumin,牛血清白蛋白。EDTA:ethylenediaminet
6、etraaceticacid,乙二胺四乙酸。Taq:Thermusaquaticu,水生栖热菌。Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。TE:Tris-CI、EDTA缓冲液。GuSCN:guanidiniumisothiocyanate,异硫氰酸胍。TritonX-100:t-octylphenoxypolyethoxyethanol,辛基苯氧基聚乙氧乙醇。3抽样和制样3.1检验批以不超过200t为一检验批,简称批。同一检验批的商品应具有相同的特征,如包装、标记、产地、规格、等级。3.2抽样数量
7、3.2.1袋装饲料按式(1)计算抽样袋数:………………………………(1)式中:N—全批袋数;a—抽样袋数。注:a值取整数,小数部分向前进位为整数。3.2.2散装饲料根据散装单位的大小和类型,一般可从上、中、下三层的中心及四角五点抽样;或分层随机采样,取样点不少于15处。3.3抽样工具3.3.1金属单管抽样器:全长65cm~75cm,槽口长50cm~55cm,口宽lcm~1.8cm,头尖形,最大外径约2.5cm,或其他等效抽样器。3.3.2取样铲。3.3.3分样器。3.3.4样品袋t可密封。3.4抽样方法3.4.1袋装饲料将扦槽向下,从每袋一角依斜对角
8、方向插入袋内,然后将扦槽旋转向上,抽出扦样器。每袋取样量不少于500g。每批所抽取的样品总量不少于4kg。3
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