SNT1089-2002-布氏杆菌病补体结合试验操作规程.pdf

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1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准sN/T1089-2002布氏杆菌病补体结合试验操作规程Procedureofcomplementfixationtestforbrucellosis2002一03一15发布2002一09一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1089-2002前言本标准是按照GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》而制定的。本标准参考了原中华人民共和国动植物检疫局编写的《中国进出境动物检疫规范》，并结合了起草单位多年的检验检疫经验。本标准的附录A、附录B、附录C

2、、附录D是标准的附录。本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人:王玉玲、朱世强、番蕾、范华炜。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。中华人民共和国出入境检验检疫行业标准布氏杆菌病补体结合试验操作规程sN/T1089-2002Procedureofcomplementfixationtestforbrucellosis范围本标准规定了布氏杆菌病补体结合试验的操作技术要求。本标准适用于家畜布氏杆菌病的血清学诊断，其他动物可参考执行。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构

3、成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3试剂和材料3.1试剂3.1.1试验用蒸馏水为GB/T6682中的三级水。3.1.2稀释液:生理盐水。3门.3补体结合抗原:按说明书使用，使用前充分摇匀。3.1.4标准阳性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.5标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.6溶血素:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.7补体:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.8

4、3%绵羊红细胞悬浮液选健康成年绵羊，无菌颈静脉采血，1.2份阿氏液加1份血，混匀，4℃冰箱内保存5d后备用。使用前摇匀取出所需量，用稀释液离心洗涤3次，每次在水平转子离心机上2000r/min离心5min，最后一次10min,除去上清液及白细胞层，取下沉红细胞泥，用稀释液稀释成3写的红细胞悬浮液。3-2材料3.2.1玻璃试管:10mmX75mm，圆底，洁净。3.2.2试管架。3.2.3微量移液器。3.2.4可调连续加样器。3.3被检血清3.3.1按常规方法采血和分离血清。血清必须新鲜，无蛋白絮凝物，无溶血，无腐败气味。3.3.2运送和保存血清防止血清冻结和受热，若3

5、d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-03-15批准2002-09-01实施1SN/T1089-20024操作方法4.1预备试验正式试验前，将试验的各种成分进行测定。4.1.1配制标准比色管4.1.1.1制备3%血红素取10mL3%红细胞悬浮液，加到15ml的刻度离心管中，水平转子离心机上2000r/min离心10min，吸弃上清液，加蒸馏水到9mL，反复吸打，液体清亮，然后加1mL8.5抓化钠溶液混匀即可.4.1.1.2按表1配制标准比色管。表1标准比色管的配制溶血度/%010203040506070809010

6、03%血红素/.L00.010.020.030.040.050.060.070.080.090.103%红细胞悬浮液/mL0.100.090.080.070.060.050.040.030.020.010稀释液/.L0.400.400.400.400.400.400.400.400.400.400.40处理混匀后离心4.12补体效价的测定4.下2.1试验当天打开若干瓶(依试验所需量而定)补体，用蒸馏水溶解后，取效价测定所需量作1/20稀释，余下的补体置4C保存备用。4.1.2.2取7个试管，按表2加样，然后将试验管置37C水浴箱中，感作30min(每5min振荡1次

7、)，水平转子离心机2000r/min离心3min，与标准比色管比较，记录溶血度。表2补体效价测定试管号12345671/20补体/.L0.010.020.030.040.050.060.07稀释液/mL0.290.280.270.260.250.240.23致敏红细胞/-L0.200.200.200.200.200.200.204.1.2.3在普通坐标纸上，以溶血度为横坐标，1/20稀释补体的用量为纵坐标，绘制曲线。找出50%溶血的补体用量，作为1个单位补体。本试验用3个单位补体，补体效价的计算见附录A。4.1.3溶血素效价的测定4.1.3.1稀释溶血素取0.2