SNT0177-2011-出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜0177—2011代替SN0177—1992出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狀狌犿犲狉犪狋犻狅狀狅犳犮犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狆犲狉犳狉犻狀犵犲狀狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犲狓狆狅狉狋20110909发布20120401实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖/犜0177—2011前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN0177—1992《出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌检验方法》。本标准与SN01

2、77—1992相比,主要技术变化如下:———变更为推荐性标准;———检测方法部分参考了ISO7937:2004《食品和动物饲料微生物产气荚膜梭状芽孢杆菌计数菌落计数技术》内容,在标准中增加乳糖亚硫酸盐试验作为确证试验,减除了含卵黄的TSC琼脂和PY培养基的使用;———补充了商品化的全自动微生物鉴定仪。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人:顾鸣、韩伟、谢小珏、王赢、陈立。Ⅰ犛犖/犜0177—2011出口食品中产气荚膜梭状芽孢

3、杆菌计数方法1范围本标准规定了出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌(犆犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狆犲狉犳狉犻狀犵犲狀狊)的计数检验方法。本标准适用于出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分:

4、培养基性能测试实用指南3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1产气荚膜梭状芽孢杆菌犮犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狆犲狉犳狉犻狀犵犲狀狊在特定的选择性培养基上,细菌菌落生长呈现黑色特点(亚硫酸盐降解为硫化物而形成黑色沉淀物,并使菌落呈现黑色),分解乳糖产酸产气,48h内能液化明胶的细菌。4设备和材料4.1无菌吸管:1.0mL和10.0mL,分刻度分别为0.1mL和1.0mL。4.2无菌培养皿:直径90mm。4.3均质器及均质袋(或均质杯)。4.4恒温培养箱或厌氧培养箱:37℃±0.5℃。4.5恒温水浴锅:

5、46℃±0.5℃。4.6厌氧发生装置。4.7放大镜和(或)菌落计数器。4.8光学显微镜10×~100×。4.9冰箱:2℃~8℃。4.10天平:感量0.1g。1)。4.11全自动微生物鉴定系统VITEKcompact1)由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。1犛犖/犜0177—20115培养基和试剂除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的分析实验室用水。5.1亚硫酸

6、盐环丝氨酸琼脂(SC):见A.1。5.2液体硫乙醇酸盐培养基:见A.2。5.3乳糖亚硫酸盐培养基(LS):见A.3。5.4缓冲动力硝酸盐培养基:见A.4。5.5亚硝酸盐检测试剂:见A.5。5.6锌粉。5.7乳糖明胶培养基:见A.6。5.8蛋白胨水:见A.7。2)。5.9VITEK2ANI生化鉴定卡6检验程序产气荚膜梭状芽孢杆菌检验程序见图1。图1产气荚膜梭状芽孢杆菌的检验程序2)由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品

7、具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。2犛犖/犜0177—20117操作步骤7.1样品的稀释7.1.1无菌操作称取检样25g(mL)放入无菌均质器或均质袋中,加入225mL蛋白胨水,均质,制成1∶10样品匀液。7.1.2吸取1∶10样品匀液1mL,加入到9mL蛋白胨水中,混合均匀,制成1∶100样品匀液。必要时,按此法将样品作进一步的10倍递增稀释。7.2接种与培养7.2.1选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入到两个无菌平皿内。7.2.2将1

8、0mL~15mL维持在44℃~47℃的SC琼脂倾注平皿,转动平皿使其混合均匀。待培养基凝固后,再覆盖上10mLSC琼脂,待其完全凝固。7.2.3翻转平板,放入厌氧罐或其他适宜容器中,厌氧环境下37℃±0.5℃下培养20h±2h。培养时间过长可能会导致平板颜色过黑。7.3平板计数7.3.1选取菌落数<150CFU的平板,计数每个平板上的黑色菌落数,记录稀释倍数。7.3.2每个平板挑取5个典型或可疑菌落(小于5个时应全部挑选)进行确证。7.4乳糖亚硫酸盐试

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