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《GBT9695.1-1988-肉与肉制品游离脂肪含量的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准肉与肉制品四环素族抗生素残留量检验GB/T9695.16-88Meatandmeatproducts-Methodfortheexaminationofthereslduesoftetracyclines━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了肉和肉制品中四环素族抗生素残留量的检验方法。本标准适用于肉和肉制品中四环素族抗生素残留量的检验。2引用标准GB9695.19肉与肉制品取样方法3原理四环素族(四环素、土霉素、金霉素)抗生素具有很强的抑菌作用。在接有特定微生物的平板培养
2、基上放入牛津杯,在牛津杯内加满试样溶液,培养后测量抑菌圈的大小。4试剂与培养基4.1试剂：4.1.1磷酸盐缓冲液(pH4.5):精确称取磷酸二氢钾(GB1274,分析纯)13.6g,溶解于蒸馏水中,定容到1000mL,高压灭菌115℃,30min,冷却后置4℃冰箱内保存。4.1.2生理盐水称取氯化钠(GB1266)8.5g溶解于1000mL蒸馏水中,高压灭菌115℃,30min。4.1.3盐酸(GB622):0.1mol/L溶液。4.1.4标准四环素原液:精确称取四环素50mg,用0.1mol/L盐酸1mL溶解,用水定容到1000mL,在4℃冰箱中可保存一周。4.
3、2培养基：4.2.1菌种培养基：胰蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化钠(GB1266)2.5g琼脂14.0～16.0g蒸馏水1000mL将以上成分加热溶解,高压灭菌121℃15min,最终pH6.5±0.1。4.2.2检定用培养基：胰蛋白胨6.0g牛肉膏1.5g酵母膏3.0g琼脂14.0～16.0g蒸馏水1000mL将以上成分加热溶解,高压灭菌121℃15min,最终pH5.8±0.1。5仪器和设备5.1培养皿：内径90mm,底部平整光滑,具陶质盖。5.2牛津杯：内径6±0.1mm,外径7.8±0.1mm,高度10±0.1mm。5.3游标卡尺：测量抑菌圈直径用。5
4、.4均质器。5.5离心机。5.6恒温水浴。5.7恒温培养箱。5.8电热干烤箱170±0.1℃。6试样6.1按GB9695.19取样。6.2至少取有代表性试样200g,用绞肉机绞2次混匀,放在封闭容器中干冰箱内贮存备用,试样要尽快分析。7分析步骤7.1检样液的制备称取试样10.0g,加入0.1mol/L磷酸缓冲液20mL小心搅匀放置60min。然后于均质器中均质(3000～6000r/min)1min,经4000r/min离心10min,其上清液为检样液。7.2菌液和检定用平板的制备7.2.1菌液的制备菌种：蜡样芽孢杆菌(BaccereusATCC11778)由卫生
5、部药品生物制品检定所提供。将菌种移种于盛有300mL菌种培养基的克氏瓶中,于30℃培养箱中培养7天。镜检芽孢数达到85％以上,用生理盐水25mL洗下菌苔,置65℃恒温水浴中加热30min,离心(2000r/min)20min,弃去上清液,如此重复洗涤芽孢悬液三次。再置于65℃恒温水浴加热30min,然后取生理盐水50mL制成芽孢悬液。置4℃冰箱中可保存一个月。7.2.2蜡样芽孢杆菌悬液用量的测定在实际检定前先试几个平板,即把不同浓度的芽孢悬液加入检定用培养基中,使0.05μg/mL浓度的标准四环素溶液可产生12mm以上的清晰、完整的抑菌圈作为最适芽孢用量。一般用量
6、为每100mL检定用培养基内加芽孢悬液0.5～1.0mL,1.0mL菌悬液中含芽孢数约为10**6。7.2.3检定用平板的制备将适量芽孢悬液加入溶化后冷却至55～60℃的检定用培养基中混匀。每个平皿内加入培养基6mL,前后摇动平皿,使含有芽孢的检定培养基均匀覆盖于平皿表面,置水平位置上盖上陶质盖,待冷凝固后,于每个平板的培养表面放置6个牛津杯,使牛津杯在半径为2.8cm的圆面上成60度角的间距。所用平板须当天制备。7.3检定7.3.1标准曲线的绘制四环素稀释液:取原液用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液稀释成0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、
7、0.800μg/mL的标准溶液(当天用当天稀释)。取检定用平板18个,分成6组,每组3个平板作为平行试验。第一组于每个平板的6个牛津杯中分别加满0.025μg/mL的标准溶液作为对照组。第二到第六组于每个平板上的6个牛津杯中,间隔加满0.200μg/mL的标准溶液作为参考。各组余下的牛津杯,根据组别顺序依次加满0.050、0.100、0.200、0.400、0.800μg/mL的标准溶液,经培养后,以各组抑菌圈直径的校正平均值绘制标准曲线。抑菌圈直径校正值(mm)等于2～6组(0.200μg/mL)抑菌圈直径的平均值减去各组抑菌圈直径平均值。用此校正值校正0.05
8、0、0.1
