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1、ICS67.040C53荡昌中华人民共和国国家标准GB/T5009.95-2003代替GB/T13110-1991蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定Determinationoftetracyclinesresiduesinhoney2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部.*中国国家标准化管理委员会OC一，IJGB/T5009.95-2003月口吕本标准代替GB/T13110-1991《蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定方法》本标准与GB/T13110-1991相比主要修改如下:—修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《蜂蜜中四环素族抗生素残留
2、量的测定》;—按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行了修改本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:福建省食品卫生监督检验所、福建省药品检验所。本标准主要起草人:林升清、马赛骏、黄宏南、耿莹莹、林桂生。原标准于1991年首次发布，本次为第一次修订。GB/T5009.95-2003蜂蜜中四环素族抗生素残留t的测定范围本标准规定了用微生物管碟法测定蜂蜜中四环素族抗生素残留量的方法。本标准适用于天然或加工蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定。2原理试样中四环素族抗生素经Mcllvaine缓冲液提取后，用SEP-PA
3、KC,:柱纯化。四环素族三种抗生素四环素、土霉素及金霉素利用薄层层析生物检测法进行分离和定性;以蜡样芽胞杆菌为试验菌株，用微生物管碟法进行定量检测。3试剂3.1Mcllvaine缓冲液(pH4):称取磷酸氢二钠(NatHPO,·12H20)27.6g、柠檬酸(C6Ha07·H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二钠37.2g，用水溶解后稀释并定容至1000mL,3.20.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5):称取磷酸氢二钾13.6g，用水溶解后稀释并定容至1000mL,115℃灭菌30min，置4℃冰箱中保存。3.3乙二胺四乙酸二钠水溶液(50g/L),3.4WatersS
4、EP-PAKC,。柱(或国产PT-C,。柱):用时先经10mL甲醇滤过活化，再用10mL蒸馏水置换，然后用10mL50g/L乙二胺四乙酸二钠流过。3.5抗生素标准品:四环素、土霉素、金霉素标准品(由卫生部药品生物制品检定所提供)。3.6抗生素标准溶液:3.6.1抗生素标准原液的配制:准确称取四环素、土霉素、金霉素标准品适量(按效价进行换算)，用0.01mol/L盐酸溶解并定容至1000pg/mL,置4℃冰箱中(可使用7天)。3.6.2抗生素标准稀释液配制:临用前取上述原液按1，0.8剂距用0.1mol/L磷酸盐缓冲液逐步稀释配制成标准稀释液。制备四环素、土霉素标准曲线的
5、标准浓度为。.16,0.21,0.26,0.32,0.40,0.50lxg/mL，参考浓度为0.25pg/mL;制备金霉素标准曲线的标准浓度为。.033,0.041,0.051,0.064,0.080,0.100lag/mL，参考浓度为0.050}cg/mL。定性试验用标准液浓度四环素、土霉素为2lag/mL,金霉素为1leg/mL,3.7展开剂:IF丁醇一乙酸一水(4+1+5)。4仪器4.1隔水式恒温箱。4.2冰箱:00C-40C。4.3恒温水浴4.4高压灭菌器4.5旋转式减压蒸馏器。4.6离心机:2000r/min,47天平:感量。.1mg,4.8层析缸:内长20c
6、m、宽15cm、高30cm,4.9长方形培养皿:1.5cmX8cmX23cm.GB/T5009.95-20034.10层析纸7cmX22cm，中速滤纸。4.11微量注射器:10pL,50川。4.12电吹风机。4.13游标卡尺。4.14吸管:容量为1mL和10mL，标有0.1ml一单位刻度。4.15注射器:容量为20mL4.16平皿:内径为90mm,高16mm-17mm，底部平整光滑，具陶瓷盖。4.17不锈钢小管(简称小管):内径6.0mm士0.1mm，外径7.8mm士0.1mm，高度10mm+。.5培养基5.1菌种培养基:胰蛋白陈10.0g;牛肉浸膏5.09;氯化钠2.
7、5g;琼脂14g-16g;蒸馏水1000mL,将上述各成分混合于蒸馏水中，搅拌加热至溶解，110℃灭菌30min，最终pH值为7.2-7.4,5.2检定用培养基:胰蛋白陈5.0g;牛肉浸膏3.0g;磷酸氢钾3.0g;琼脂14--16g;蒸馏水1000mL,将上述各成分混合于蒸馏水中，搅拌加热至溶解，110℃灭菌30min，最终pH值为6.5士0.1,6试样处理6.1定量试验用样液制备:称取混匀的蜂蜜试样10.0g，加人30mLpH4.。的Mcllvaine缓冲液，搅拌均匀，待溶解后进行过滤，滤液分数次置于注射器中，用经预处理的SEP-PA
