《DB13T1420-2011-马铃薯晚疫病菌抗药性检测技术规程》.pdf

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1、ICS65.020.20B05DB13河北省地方标准DB13/T1420—2011马铃薯晚疫病菌抗药性检测技术规程TechnologicalrulesfordetectingfungicideresistanceinPhytophthorainfestansonpotato2011-07-07发布2011-07-17实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1420—2011前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：王文桥、张小风、马志强、韩秀英、孟润

2、杰、赵建江。IDB13/T1420—2011马铃薯晚疫病菌抗药性检测技术规程1范围本标准规定了马铃薯晚疫病菌抗药性检测的术语和定义及检测方法。本标准适用于马铃薯晚疫病菌对杀菌剂的抗性检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1抗药性fungicideresistance一种杀菌剂当用其标签推荐的剂量防治作物病害时，即使重复试验也无法达到所期望的防治效果，该靶标病菌群体的敏感性下降的遗传变化称为抗药性。2.2敏感基线sensitivitybaseline：在同类作用方式的杀菌剂使用之前，靶标病菌群体中不同菌株对一种药剂的敏感性(EC50值)分布曲线，常用平均

3、值及95%置信限表示。2.3敏感型sensitivitytype：根据菌株对药剂的敏感性(EC50值)或抗性水平，或在区分剂量下药剂对菌株的抑制程度，将菌株划分成敏感、低抗、中抗、高抗等不同类型。2.4菌丝生长速率法马铃薯晚疫病菌菌丝体在含药培养基平板上培养而生长受到抑制的毒力测定方法，适用于检测马铃薯晚疫病菌对能显著抑制其菌丝生长的苯基酰胺类、QoI类、羧酸酰胺类、乙酰胺类、氨基甲酸酯类、苯甲酰胺类等杀菌剂的抗药性。2.5叶盘漂浮法马铃薯晚疫病菌孢子囊接触漂浮于药液上的叶盘背面而萌发受到抑制的毒力测定方法，适用于马铃薯晚疫病菌对具有内吸性的苯基酰胺类、QoI类、

4、羧酸酰胺类、乙酰胺类、氨基甲酸酯类、苯甲酰胺类等杀菌剂的抗药性检测。3测定方法3.1菌丝生长速率法适用于检测马铃薯晚疫病菌对能明显抑制其菌丝生长的甲霜灵、精甲霜灵、噁霜灵、嘧菌酯、吡唑醚菌酯、烯酰吗啉、氟吗啉、双炔酰菌胺、霜脲氰、霜霉威、氟吡菌胺、氰霜唑、氟啶胺、代森锰锌、百菌清及其混剂的抗性。1DB13/T1420—20113.1.1供试菌株的采集、分离及保存田间采集感染晚疫病的马铃薯新鲜叶片，夹入洗净蘸干的马铃薯块茎中，做好标记，带回实验室，16~18℃培养2～3d。在无菌条件下，将块茎上霉状物用接种针挑至含100µg/mL氨苄青霉素、20µg/mL利福平及1

5、00µg/mL五氯硝基苯的黑麦琼脂培养基(Ryeagar,RA)平板上，18~20℃培养4~5d，将未受杂菌污染的菌丝转接到新的RA平板上，18~20℃培养7～10d后转至试管中RA斜面上，培养至菌丝长满，在10℃条件下保存，每3个月转接1次。3.1.2供试药剂的收集及保存收集杀菌剂原药，保存于避光、低温（0-4℃）及干燥条件下。3.1.3含药培养基的制作称取适量的原药，用有机溶剂（如丙酮、二甲亚砜等）溶解，以无菌水稀释成母液（丙酮含量应低于总体积的1%），再加入无菌水稀释成系列浓度的药液，按照药液与培养基体积比1:9分别加入溶化的RA中，混匀，泼碟，配制成含不同

6、浓度药剂的RA平板。对照仅加入适量DMSO或丙酮等溶剂。3.1.4接种及培养将菌株在RA平板上培养10d，从菌落边缘以直径0.5cm打孔器打菌饼，用接种针挑取菌饼接在含药RA平板（直径9cm)中央，以不含药RA平板为对照，每皿接1个菌饼，每处理重复3次。盖上皿盖，18-20℃培养10d。3.1.5结果检查待对照菌落长至直径约7cm后，用直尺十字交叉测量菌落直径(cm)2次，计算平均值。3.1.6数据统计和分析按下式计算各处理（不同浓度的药剂）对菌丝生长的抑制率，结果保留到小数点后两位。D0−D1P=×100…………………………………………………(1)D0−0.5式

7、中：P为抑制率（％）；D0为对照菌落直径（cm）；D1为处理菌落直径（cm）。采用SAS、DPS等统计软件，进行药剂浓度对数值（X）与抑制率的几率值（Y）之间的线性回归分析，求出每种药剂对每个菌株的毒力回归方程式（Y=a+bX）、相关系数和置信限。由毒力回归方程式求出菌株对药剂的敏感性(EC50值)。3.1.7敏感基线(EC50)的建立从未使用过某种药剂及其相同作用机理药剂的地区采集分离约100株马铃薯晚疫病菌，测其对该药的敏感性(EC50值)。将供试菌株对某种药剂的敏感性(EC50值)划分成不同区段（一般5个区段），确定敏感性分布范围（例如从较小的a到较大的b)

8、，写出浓度