《GBT17999.8-1999-SPF鸡试管凝集试验》.pdf

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1、GB/r17999.8-1999前言用血清平板凝集试验监测鸡白痢沙门氏菌感染，结果难以判定时，可用试管凝集试验(TA)进行复检，为此本标准规定了SPF鸡试管凝集试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法.本标准为《SPF鸡试管凝集试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T17999.1-1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验;GB/T17999.3-1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.4-1999SPF鸡琼脂

2、扩散试验;GB/T17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T17999.6--1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T17999.7-1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;GB/T17999.9-1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物中心。本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红。中华人民共和国国家标准Gs/T17999.8一1999SPF鸡试管凝集试验SPFchicken-Tubeagglutinationtest1范

3、围本标准规定了试管凝集试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染鸡白痢沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌后的抗体监测。2原理同血清平板凝集试验，亦是细菌性抗原与相应的抗体结合后在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象，只是结果判定以凝集价表示3试剂和材料3.1抗原:试管凝集试验用鸡白痢一鸡伤寒抗原(含菌10亿/mL)32阳性、阴性血清。13被检血清口3.4o.5Y,石炭酸生理盐水:了，炭酸59;a化钠8.59;蒸馏水1000mL;混合溶化，6.897Pa20min消毒备用15常规血清学试验用品。4操作程序4.1每份被检血

4、清需要5支小试管(口径8mm-10mm)。第1管加石炭酸生理盐水1.8mL，其余管各加Iml。4.2第1管加被检血清。.2mL，与石炭酸生理盐水混匀(使成1:10稀释)。取1mL移至第2管，混匀后连续倍比稀释至第4管，最后从第4管内吸出1mL弃去。如此各管血清最后稀释依次为I:20,1:40,1,80,1:160,1:3204.3各管加入抗原液1mL4.4振荡混匀后置37C感作24h，观察结果。4.5梅次试验须设三种对照各一份。4.5.1抗原对照:在试管中加抗原液1mL，再加。.5%石炭酸生理盐水1mLo4.5.2阳性血清对照阳性血清稀释至原来效价

5、，每管加入抗原液1mL4.5.3阴性血清对照:操作方法同被检血清。4.5.4全部试管振荡后，置37`C24h后移入4'C-8C冰箱过夜，使结果更易判定4.6结果观察国家质量技术监督局1999一11-10批准2000一04一O1实施GB/T17999.8-19994.6.1从40C-8℃冰箱取出试管架，暂不振动试管。4.6.2轻轻取出每支试管，先观察试管内上清液和管底凝集物，再轻振管底，使凝块从管底升起，最后按液体清浊、凝块大小记录。4.6.3观察结果时应首先观察抗原对照与阴性血清对照，均应呈“一，’(即不凝集)，阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验

6、可靠。4.6.4凝集结果判定见表to表1试管凝集结果判定类别试管所见结果1细菌全部形成凝块，上层液完全透明++++2大部分细菌形成凝块，上层液透明度达750/a+++3约50%细菌形成明显可见凝集块，上层液透明度达50%+十4仅有少部分细菌形成小凝块，上层液透明度达25%+无凝集块，液体均匀混浊(有部分菌体因静置而沉于管底，轻轻摇后细5菌如云烟状升起，但很快消失)4.6.5效价以呈现“++”凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。5结果判定凝集价)1:80为阳性;凝集价为1:40为可疑;凝集价镇1:20为阴性。