流动状态下adamts13羧基端的功能-研究

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1、独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

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3、lebrandfactor，VWF）的生理降解特性时，从正常人血浆中纯化的一种金属蛋白酶，该酶能够裂解VWF的Tyr1605-Met1606键从而抑制血小板聚集及微血管性血栓形成，其活性在低浓度盐溶液或1mM的尿素溶液中2+2+增强，并受PH值与Ba、Ca等二价金属阳离子的调节。它是具凝血酶敏感蛋白模体的去整合素域和金属蛋白酶域蛋白（Adisintegrinandmetalloproteinasewith[3,4]thrombospondinmotif，ADAMTS）家族中的一个新成员,被命名为ADAMTS13。ADAMTS13活性水平的异常是导致血浆

4、中超大VWF多聚体（UL-VWF）不能被降解，从而引起微循环中血小板黏附和聚集，形成血栓，即血栓性血小板减少性紫癜（TTP）[1]的主要病因，而TTP以微血管病性溶血性贫血、血小板减少、神经系统异常、肾脏功能损伤和高热为其特征性五联征。近年来，研究表明ADAMTS13还可能与心血管疾[5][6][7]病、妊高征子痫前期、遗传性胎儿生长受限（FGR）发病机制有关。一．ADAMTS13的分子结构和功能[8]有研究表明，ADAMTS13基因定位于9号染色体长臂（9q34），cDNA全长4597kb，由29个外显子组成，开放阅读框为4284bp，编码1427个

5、氨基酸。ADAMTS13mRNA存在于人体多个组织器官（如肝脏、骨骼肌、前列腺及脑组织等）中，其在不同的组织中的大小也不尽相同，而肝脏是合成全长肽链的主要部位，仅在其中发现4.6kb的ADAMTS13转录本。血浆中ADAMTS13的浓度大约为1µg/mL或者5nM，半衰期为1-2天。[9]ADAMTS13蛋白结构从氨基端依次为：信号肽（signalpeptide）、含41个氨基酸残基前导肽（propeptide）、金属蛋白酶域（metalloproteasedomain，M）、去整合素域（disintegrin-likedomain，D）、Ⅰ型凝血酶敏

6、感蛋白域（thrombospondin-1,TSP1，T）、富含半胱氨酸结构域（Cys-richdomain，C）和空间结构域（ADAMTSspacer，S）。空间结构域之后为7个TSP1重复序列，其羧基端还有两个补体重复（CUB）结构域。4华中科技大学硕士学位论文[9]图1：ADAMTS13结构1：信号肽2：前导肽3：金属蛋白酶域4：去整合素域5：TSP1域6：富含半胱氨酸域7：空间结构域8：TSP1重复序列9：CUB域二．ADAMTS13各结构域在裂解VWF过程中的功能相关研究静止状态下，在低离子强度物质尿素和胍的变性作用下，VWF超大型多聚体由纱

7、织球状展开为丝状，A2结构域Tyr1605-Met1606键裂解部位暴露，从而被ADAMTS-13[10]裂解产生分子量为140Kda和176Kda的两个片段。JihuiAi等在基因水平对ADAMTS13各个功能域依次进行缺失突变和仅缺失中间的一个或两个功能域，从金属蛋白酶域到空间结构域的氨基酸功能域的任何区域缺失，将导致酶的活性明显降低或者失去对底物的特异性而引入另外的裂解位点，而在静止状态下，缺失羧基端TSP2-8和CUB1+2片段（delTSP2-8CUB1+2）的重组ADAMTS13与全长（Full-length，FL）ADAMTS13相比酶活

8、性、与底物的亲和力均相同。可见，静止状态下TSP2-8CUB对于VWF多肽裂解活性不是必需的。