铁皮石斛种质资源评价创新及栽培技术研究

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1、万方数据摘要铁皮石斛种质资源评价创新及栽培技术研究本研究采用HPLC建立安徽大别山、安徽霍山、云南红河、云南玉溪、云南思茅、云南文山、云南石屏、福建宁化、江苏南京、浙江天台、浙江仙居、浙江鄞县、广西天峨12种不同产地铁皮石斛特征指纹图谱，并测定其石斛多糖、氨基酸、微量元素、重金属含量后进行不同产地铁皮石斛种质资源评价；同时进行铁皮石斛四倍体诱导鉴定及栽培技术创新研究，以便为优质铁皮石斛药材生产及管理提供理论、实践依据。具体内容及研究成果如下：1．对12种不同产地铁皮石斛进行种质资源评价，结果显示：1

2、2种不同产地铁皮石斛指纹图谱共有23个特征峰；经聚类分析后将12种不同产地铁皮石斛共分为四类；产于云南玉溪、福建宁化、江苏南京、浙江天台铁皮石斛茎段中铜、砷、镉含量分别超标26．25％、44．5％、27．33％、122．3％，其它产地铜、铅、汞、砷、镉五种重金属含量差异不大；来源于云南红河、云南文山、浙江天台的铁皮石斛所含的石斛多糖平均含量最高分别为：32．09％、32．86％、36．03％；浙江天台人体必需氨基酸质量分数最高达16．90mg·g～。2．铁皮石斛种质创新，经不同质量浓度的秋水仙素(C

3、22H2506)和0．02g．mL‘1二甲基亚砜(DMSO)混合水溶液处理后进行组织培养，通过对变异株进行形态学、细胞学及流式细胞仪鉴定，获得稳定的四倍体植株，其DNA相对含量为400，而二倍体仅为200；四倍体植株叶片中叶绿素含量、可溶性蛋白、可溶性糖含量均高于二倍体，分别为5．03mg·g一、3．59mg·g～、2．98mg·gJ；叶片抗氧化酶(POD、SOD)活性均显著高于二倍体，分别为9．08U·g-I．min-1、180．4U·菩1，且四倍体植株MDA含量累积明显降低。3．通过一步成苗、无

4、激素培养对铁皮石斛组织培养生产优化：(1)一步成苗：铁皮石斛从种子萌发开始，不经过原球茎增殖分化和茎段增殖直接成苗；(2)一步成苗最适萌发培养基为：MS培养基+6-BA2．0mg·L一+NAA0．5mg‘L～+KTl．0mg‘L以+土豆泥150～200g'L一，壮苗生根最适培养基为：1／2MS+6一BA2．0mg·L～+NAAO．3mg·L。1+土&5泥,150—200g-L以+香蕉泥150～200g'LJ；(3)铁皮石斛的一种无激素组织培养方法，包括从铁皮石斛种子萌发培养基培养、圆球茎的培养、茎段

5、增殖分化和生根壮苗四个不同的生长发育阶段；(4)铁皮石斛无激素培养过程中由天然添加物(土豆、香蕉)万方数据铁皮石斛种质资源评价创新及栽培技术研究代替激素。4．蘑菇渣复合基质对铁皮石斛生长及有效成分的影响，在相同的栽培管理条件下，移栽30d后，组培苗在处理GC、GD中成活率达97．3％，95．8％显著高于其他处理和对照，其中处理GC的株高、茎粗、根长和新根数也显著高于其他处理；移栽365d后，处理GC的成活率、株高、茎粗、根长和新根数依然最高，分别达到94．6％、7．87cm、0．307cm、5．57

6、em、7．67个与其他处理差异显著，同时石斛多糖和总生物碱含量在处理GC中也达到最大，分别为8．88％和0．30％并与其他处理及对照差异显著。5．铁皮石斛耐热性研究表明：喷施不同浓度水杨酸后，铁皮石斛幼苗在高温胁迫下的耐热性表现为：在高温胁迫环境下，随着胁迫时间的延长，不同浓度水杨酸处理均能有效地缓解高温对铁皮石斛植株伤害；1．5—2．0mm01．L。1水杨酸处理使铁皮石斛叶片中SOD、POD活性显著提高，0．5～1．5mm01．L。1水杨酸处理叶片中CAT、APX活性显著提高；1．5～2．0mmo

7、l·L。水杨酸处理可显著促进叶片Pro、可溶性糖和可溶性蛋白的积累，有效抑制MDA含量的增加，且不同浓度处理之间差异显著。其中以1．5mmol·Ld浓度处理效果最好。关键词：铁皮石斛；种质资源评价；一步成苗；四倍体；水杨酸；蘑菇渣复合基质II万方数据ABSll乙气CTGERMPLASMINNOVATIONEV札UATIONANDAIUlIFICIALCUIJI、厂ATIONSTUDYOFDENDROBIUMoFFICINALEABSTRACTThisresearchthroughthe12diffe

8、remoriginofDendrobiumofficinalefingerprintestablishment，Dendrobiumofficinalepolysaccharides，aminoacids，tracedemems，heavymetalcontentdetermination，DendrobiumQ历c切口跆germplasmresourcesevaluation；AtthesametimethroughtheDendrobiumofficinalepo