wnt2和wnt3在慢性束缚应激引起的抑郁行为中的作用与其机制-研究

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1、万方数据Chineseabstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．】．Englishabstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5Symboldescription⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11Introduction．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1．3MaterialSandMethods⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15Results⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27DiSCUSSion．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47References．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5lAcknowledgements⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55万方数据山东大学硕士毕业论文Wnt2和Wnt3在慢性束缚应激引起的抑郁行为中的作用及其机制研究硕士研

3、究生：周文娟导师：黄淑红专业：神经生物学中文摘要研究背景：Wnt蛋白是分泌型糖蛋白，能够激活不同的信号通路，包括经典Wnt．／13一catenin信号通路，非经典的Wnt／PCP和Wnt／Ca2+通路。研究发现，Wnt信号通路在胚胎发生和神经系统发育中发挥了重要作用，如突触发生，树突形态构建以及海马等结构的形成中。Wnt／13．catenin信号通路与成年海马中的神经再生也密切相关。而神经再生在抑郁症的发生、发展及治疗中至关重要，提示Wnt信号通路可能参与抑郁过程中。有文献报道Wnt信号通路下游信号分子如GSK

4、一3p等在抑郁症的发病及其治疗中发生明显变化并参与其中。但是关于Wnt分子是否参与抑郁症的发生的直接证据很少。应激是导致抑郁症发生的一个重要因素。研究发现Wnt受体及其Wnt下游信号通路分子也参与到应激过程中，例如慢性不可预见性应激会使海马中Wnt受体Frizzled6(Fzd6)表达减少；在慢性社交挫败应激的小鼠中，Wnt下游信号通路的关键性分子disheveled一2(DVL2)在伏隔核部位表达下降。最近有报道发现急性和慢性应激能够增加Wnt信号通路下游的抑制分子Dickkopf-1(Dkk一1)在海马中的

5、表达。以上都是基于对Wnt信号通路分子做的研究。但是，Wnt分子作为激活Wnt／13．catenin信号通路的配体是否直接参与到应激中目前还不清楚。本课题中，我们采用慢性束缚应激(CRS)模型，运用动物行为学测试和万方数据山东大学硕士毕业论文分子细胞生物学等方法，系统地研究是否有Wnt分子参与到CRS引起的抑郁行为中以及Wnt分子参与CRS引起的抑郁行为的具体机制。目的：1．探究有无Wnt分子参与CRS引起的抑郁行为。2．探究Wnt分子参与CRS引起的抑郁行为的机制。方法：1．慢性束缚应激(CRS)小鼠每天从上

6、午8点到10点在通风聚丙烯束缚管中束缚应激2小时，连续14天。2．脑立体定位和病毒微量注射小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后固定于脑立体定位仪上。选择腹侧海马注射病毒，注射量为每侧1微升，注射坐标(以前囟点为零点)如下：前后，．2．8毫米；左右，±2．5毫米；背腹侧，．2．3毫米。3．行为学测试3．1旷场实验本课题中利用旷场实验测试小鼠的自主运动能力。小鼠被放进旷场中央区，检测10分钟内的运动总距离作为评价其自主运动能力的指标。3．2蔗糖偏好实验在CRS最后一天，从晚上8点开始对小鼠饮水进行控制。适应阶段小鼠只有在早上

7、8点到9点可饮用1％的蔗糖水，适应3天。测试阶段在8点到9点分别给予小鼠一瓶1％的蔗糖水和一瓶水，测试时间为2天，检测两天内蔗糖水和水的饮用量。蔗糖偏好指数表示为：蔗糖的摄入量／水和蔗糖摄入总量×100％。3．3强迫游泳实验强迫游泳实验是在一个玻璃容器中进行(25厘米高，直径10厘米，水温22度，水深18厘米)，将小鼠放入容器中观察6分钟的不动时间。不动定义为身体静止，只有尾巴或前爪小幅度的运动以保持头部露出水面。3．4悬尾实验将小鼠尾端悬挂在特定装置上观察6分钟，记录不动时间。2万方数据山东大学硕士毕业论文4

8、．BrdU注射和免疫组织化学染色对于细胞增殖的分析，小鼠腹腔注射50mg／kg的溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)一次，2小时后灌注。对于神经元存活的分析，小鼠每24小时给予一次共4次BrdU注射，4周后进行灌注。小鼠用5％的水合氯醛麻醉并用4％的多聚甲醛(PFA)灌注和后固定。脑片切成30微米用于免疫组织化学染色。BrdU的一抗使用浓度为1：500，NeuN的一抗使用浓度为1：1000。免