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1、姜黄素长循环脂质体制备和药动学探究［摘要］姜黄素具有抗炎、抗氧化、降血脂和抗肿瘤等多重药理作用，但其水溶性差、体内消除快，半衰期短的缺陷使其临床应用受到限制。将姜黄素制备成长循环脂质体（Cur-LCL）可望改善其水溶性差的问题并有效延长其体内循环时间。该研究以乙醇注入法制备Cur-LCL,考察其理化性质，并以姜黄素原料药（Cur）和姜黄素普通脂质体（Cur-Lips）为对照组，通过体外释放和大鼠尾静脉注射给药后药动学行为考察Cur-LCL的长循环作用。结果表明所制备的Cur-LCL呈类圆形，粒径分布均匀，平均粒径110nm,Zeta
2、电位-5.8mV,包封率和载药量分别为80.25%,2.06%；体外释放结果显示Cur-LCL在7,24h内累积释放率分别达到48.95%,88.92%,与Cur和Cur-Lips相比具有明显缓释特征；大鼠尾静脉注射给药后的药动学研究表明，与Cur和Cur-Lips相比，Cur-LCL的AUC显著增大（P98%,批号12041502）；姜黄素对照品（中国食品药品检定研究院，纯度98.8%,批号110823-201004）；大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，纯度98.8%,批号110756-200110）；大豆卵磷脂（注射级，上海
3、太伟药业有限公司，批号20120201）；胆固醇（日本精细化工，批号B11223）；PEG2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE,日本精细化工，批号B11218）；甲醇(色谱纯‘HoneywellBurdick&Jackson公司，批号10071753)；其他试剂均为国产分析纯。清洁级SD大鼠，雌雄各半，体重(200±10)g,浙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK浙2008-0016o所有动物实验均按照浙江大学动物饲养和使用指南进行。2方法2.1脂质体的制备2.1.1姜黄素长循环脂质体的制备采用乙醇注入
4、法。精密称取姜黄素原料药3.0mg,大豆卵磷脂100.0mg,胆固醇10.0mg,PEG2000-DSPE5.0mg溶于2.0mL乙醇作为有机相，pH6.5的磷酸盐缓冲液作为水相，在1200r・min-1的搅拌转速下，将有机相匀速缓慢滴入50匸保温水相中，滴毕，继续搅拌2h,挥除有机溶剂，得Cur-LCLo2.1.2姜黄素普通脂质体的制备除不加入PEG2000-DSPE外，姜黄素普通脂质体(curcuminliposomes,Cur-Lips)的制备均与2.1.1项下方法相同。2.2形态、粒径和Zeta电位取适量Cur-LCL混悬液
5、滴于铜网上，静置10min后用滤纸片吸干，再滴加2.0%磷鹄酸溶液于铜网上负染1min,自然挥干，用透射电子显微镜观察形态并摄制照片；取Cur-LCL用适量蒸億水稀释后，采用粒径分析仪测定平均粒径和Zeta电位。2.3包封率和载药量的测定采用低温高速离心法计算包封率与载药量[6-7],精密量取Cur-LCL适量，14000r•min-1离心40min,取上清液1inL于10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，经0.22um微孔滤膜滤过，续滤液经HPLC测定游离姜黄素含量，记作W1；取离心后沉淀物，蒸馆水洗涤3次，真空冷冻干燥后精密称定总质
6、量，记作W；另取1mLCur-LCL于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，经0.22卩m微孔滤膜滤过，续滤液经HPLC测定Cur-LCL中总的姜黄素含量，记作W0；按下式分别计算Cur-LCL的包封率(encapsulationefficiency,EE)和载药量(drugloading,DL)OEE=(W0-W1)/WOX100%,DL=(W0-W1)/WX100%o2.4体外释放考察采用动态透析法考察体外释放[8],选取含30%乙醇的pH5.8磷酸盐缓冲溶液为释放介质。分别精密称取适量Cur,Cur-Lips,Cur-LCL各3份(均
7、含药1mg),置于预先处理过的透析袋(Mw=7000Da)内，排除气泡后密封，置于100mL释放介质中，于(37±0.5)°C恒温水浴振荡(75r•min-1),于0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,2.5,3,4,5,6,8,10,12,18,24,28h准确取样1mL,并立即补加等量同温新鲜释放介质，样品经0.22uni微孔滤膜滤过,取续滤液经HPLC测定释放介质中姜黄素的含量，计算累积释放率(Q)o2.5药动学研究2.5.1血浆样品处理精密移取血浆样品200uL置于离心管中，定量加入20mg-L-1内标贮备液20PL混
8、匀，加入乙酸乙酯1mL进行萃取，涡旋混合3min,离心移取上清液并真空干燥，残渣用20011L甲醇溶解，充分涡旋振荡后10000r・min-1离心10min,取上清液IIPLC分析。2.5.2血浆中姜黄素分析方法的建立色谱条件：Agi
