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1、影响“甘油化红细胞”制备质量的关键操作步骤李延成衡水市中心血站河北衡水053000【关键词】甘油化红细胞;冰冻红细胞;质量;量化【中图分类号】Q2—06【文献标识码】B【文章编号】1008-6315(2015)12-0489-01“甘油化红细胞”是“冰冻红细胞”的前身，是制备“冰冻红细胞”的关键操作环节•甘油作为目前冰冻保存红细胞最为常用的保护剂,在减少冰冻后红细胞损伤方面起到重要作用[1].我国大多数血站以“低温慢冻法”制备冰冻红细胞，即复方甘油保存液与红细胞混合后的终浓度为40%，在一65°C以下的条件下冰冻并保
2、存，有效保存期限为10年[2].由于“冰冻红细胞”只是“解冻去甘油红细胞”的中间过程，国标中只是对起始血液、甘油加入、冷冻保存条件上有部分陈述，并未规定具体操作步骤与方法，质量控制环节同样缺失，造成行业内“甘油化红细胞”操作差异化很大,致使最终产品一一“解冻去甘油红细胞”不合格率增加，加重稀有血型血液的供需矛盾•出于为提高“冰冻红细胞”制备质量,减少人为操作造成的质量影响,笔者就“甘油化红细胞”的几个关键操作环节以个人观点阐述如下：1起始血液要求国标规定将自采集日期6d内的全血或悬浮红细胞中红细胞分离出，并将一定浓度
3、和容量的甘油与其混合后，使用速冻设备进行速冻或直接置于一65°C以下的条件下保存•由于血液保存液配方不同(ACD或CPD),保存期限也不同,而只有6d内的时限要求，最终质量肯定会有所差別.但笔者认为无论是ACD或CPD保养液均不宜超出6d再制备“冰冻红细胞”•另外，对采血源头加以控制，要求釆血顺畅并足量，肉眼观察起始血液无色泽异常、溶血、凝块、气泡及重度乳糜等情况，并于48小时内完成过滤去除白细胞的红细胞作为“甘油化红细胞”起始血液.2复温及恒温平衡行标中没有对起始血液进行复温的要求，血液自2-6°C环境中取岀去上清
4、后直接加注甘油，甘油化后在室温中静置平衡30min[3].由于我国南北四季温差较大，室温中静置本身无可操作性意义•而国外资料中要求对红细胞甘油化前后须进行复温或特殊孵育，复温是采用将红细胞在室温下静置2小吋或在37°C环境下加温1Omin来实现的[4].笔者认为，将红细胞与甘油充分混合才可以降低冰冻损害，从而获得理想的红细胞冋收率•复温可以恢复红细胞的代谢活力，更有利于甘油进入红细胞内置换细胞内水分子'短吋间内实现细胞内外渗透压的平衡•我们的做法是将起始血液及甘油共同放入3O~37°C环境内（干式融化箱）复温10~1
5、5min,加注甘油完成后再次以同样条件平衡10~15min.3去除上清液血液上清液（血浆或保存液）以水分子为主，可以直接对甘油进行稀释，上清液的量直接影响甘油终浓度，所以复温后去除上清液是人为操作中至关重要的环节•根据多年操作经验，笔者推荐以22€、4660g、5min的条件离心，用分浆夹将上清液尽量去除干净.4量化加注甘油由于献血者个体Het（红细胞比容）有所不同,造成每袋血液的红细胞体积及重量差异性较大•目前国内制备冰冻红细胞以红细胞单位数为基准,每一单位红细胞加入57.1%复方甘油保存液160ml,并没有考虑个
6、体差异性因素，因此“甘油化红细胞”终浓度40%肯定有所偏差;另外，细胞内水也是影响甘油终浓度的关键因素，国内普遍未将其因素考虑在内，至使“甘油化红细胞”的甘油终浓度大大低于40%,严重影响红细胞冰冻保存效果[5].根据我站2010-2014年期间数据分析，去上清后的浓缩红细胞Het平均在0.80左右,计算得出浓缩红细胞与所需加入的57.1%甘油容量比为100:180（即每100ml浓缩红细胞需加入浓度为57.1的甘油180ml）,可满足甘油终浓度40%的要求.5去除多余甘油起始血液原有体积及注入的甘油体积之和，已远远
7、超出原血袋的容量，所以在甘油加注前要进行转袋•过人的体积不便于包装、冰冻及解冻，虽然有文献报道冰冻前去除多余甘油与解冻后去除多余甘油，质量检测无明显差异[6].但笔者认为，由于细胞内外渗透压已平衡,多余的甘油已无实际性意义，冰冻前去除多余甘油更便于操作•同吋也建议，去除甘油吋离心力不宜过高,推荐在4€、2600g、8min的条件下离心;甘油去除不宜过多，去甘油后总体积在300ml左右为宜.6其他建议以无菌连接方式(无菌接管机)完成各项连接操作;使用ACP-215进行甘油加注更为理想，可减少人为因素的影响，但成本较高，
8、需综合考虑；无论手工还是机器操作都要在甘油化完成后进行排气处理，可减少冰冻破袋几率;采用双热合操作进行管道封口，两次热合间距大于3cm,可避免因热合口渗漏造成的血液报废.结论:综上所述，笔者认为，目前国内“冰冻红细胞”操作SOP有待统一与完善,质量更有提升空间;国标只是最低标准，在满足国标的同吋，应尽可能细化操作规程，降低或减少人为影响因素，进
