心脑通络液对实验性动脉粥样硬化大鼠模型bc1-2表达的影响

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1、心脑通络液对实验性动脉粥样硬化大鼠模型Bcl-2表达的影黑龙江屮医药大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150040摘要：目的：在建立腹主动脉粥样硬化大鼠模型基础上，通过动物实验，探讨心脑通络液对动脉粥样硬化大鼠病变腹主动脉Bcl-2表达的影响，为治疗动脉粥样硬化的临床用药提供实验依据。方法：选取健康雄性大鼠40只，动物随机分为5组，即空白组、模型组、阿托伐他汀组、心脑通络液低剂量组、心脑通络液高剂量组。参照文献，采用高脂饲料饲养结合球囊损伤腹主动脉内膜制备动脉粥样硬化模型，连续喂养4周并结合球囊损伤腹主动脉内膜后，继续给药10周，末次给药后24小时，动物处死，取材。观察心脑通络液对动脉粥样

2、硬化大鼠病变腹主动脉Bcl-2表达的影响•结果：1•腹主动脉粥样硬化大鼠模型复制成功；2.心脑通络液可増强动脉粥样硬化大鼠腹主动脉细胞Bcl-2表达；结论：心脑通络液可増强动脉粥样硬化大鼠腹主动脉细胞Bcl-2表达，起到抗凋亡作用。关键词：心脑通络液；动脉粥样硬化AS大量研究证明，动脉壁内皮损伤及脂质的沉积是口前公认的AS始动因素[1],血液中的脂质在内皮下沉积。随后单核细胞黏附在内皮细胞损伤处进入内皮下，吞噬脂质成为泡沫细胞，形成脂肪斑。血小板也逐渐聚集并黏附于内皮的损伤处。吞噬细胞、内皮细胞及黏附于内皮细胞损伤处的血小板释放生长因子刺激平滑肌细胞进入内膜，增生并合成胶原纤维，脂肪

3、斑演变成纤维斑块。随着这一过程的发展，脂质不断沉积，多种炎性细胞逐渐浸润，纤维帽渐渐变薄，慢慢演变为不稳定斑块。以不稳定斑块的裂缝、糜烂或破裂为基础形成血栓，最终导致严重心脑血管损害[2-4]o我们观察了心脑通络液对动脉粥样硬化大鼠病变腹主动脉Bcl・2表达的影响，现报道如下。1•实验材料1.1实验动物：健康SD大鼠40只，雄性，体重1.5〜2.0kg,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。1.2实验药物1.2.1心脑通络液：由黃茂、地龙、桃仁红花、当归尾、赤芍、川苇、太子参、水蛭、菟丝子等组成。有黑龙江中医药犬学附属第一医院制剂室提供。122阿乐邙可托伐他汀钙片)：规格，10mg/片

4、，北京红惠生物制药有限公司。1.3主要试剂：BCL・2试剂盒武汉博士德生物工程有限公司1.4主要仪器：酶标仪奥地利博塞ht2型、OLYMPUS光学显微镜日本BX60、病理图像数码分析系统麦克奥迪实业集团Med6.02.实验方法2.1分组、给药SD随机分成5组：空白组、模型组、阿托伐他汀组、心脑通络液低剂量组、心脑通络液高剂量组。除空白组喂普通基础饲料外，其余四组均喂高脂饲料，连续喂养4周并结合球囊损伤腹主动脉内膜后。正常对照组和模型对照组均给等体积蒸徭水；阿托伐他汀组予6mg/kg/d；心脑通络液高、低剂量组均给予心脑通络液10.71ml/kg/d(低剂量组给药前将心脑通络液用蒸憾水

5、按14稀释)，继续给药10周，末次给药后24小吋，动物处死，取材。2.2Bcl-2免疫组织化学检测在造模成功lw、2w、4w>8w四个吋间点，检测bcl-2,人鼠肌肉注射速眠新(0.15mL/kg)麻醉后，取仰卧位，以腹主动脉病变部为中心进行组织取材约lcm,步骤如下：(1)大鼠处死后，取腹主动脉血管组织标本，经4%多聚甲醛液固定,石蜡包埋，切片，脱蜡至水；(2)3%H2O2室温静置lOmin,消除内源性过氧化物酶的活性；(3)PBS液洗3次各5min；(1)抗原热修复，将切片浸入O.Olmmol/L枸椽酸钠缓冲溶液，微波炉里加热至沸腾；(2)滴加50μl正常山羊血清封闭液,室

6、温下孵育20min,甩去多余液体；(3)滴加&lota;抗50μl(I：100比例稀释)，4°C冰箱过夜，阴性对照不加&lota;抗；(4)37°C复温45min,PBS液冲洗3次，滴加生物素标记II抗，室温下孵育20min,PBS液冲洗;(5)滴加50μl链霉抗生物素蛋白■过氧化物酶溶液，室温下孵育30min,PBS冲洗3次;(6)DAB显色lOmin,在显微镜下掌握染色程度，PBS冲洗；(7)苏木素复染2min,盐酸酒精分化，自来水冲洗；(8)脱水、透明、封片、镜检。使用病理图像分析系统对免疫组化染色切片进行分析。在200倍镜下每组随机取8张片，每张片4个视野，经显微

7、镜摄像仪摄入，按512×512像素分布，并保存在病理图像分析系统内，用组化分析进行分析，先进行分割，选择点状分割将阳性物标记为棕黄色，除去非特异染色，记录阳性目标总面积和统计场总面积的比值(面密度)，进行统计学处理。2.3统计学处理数据用均数±标准差(±s)表示,运用SPSS19.0统计软件处理，各组间比较采用单因素方差分析，然后用Student-Newman-KeulsTest进行每两组间比较，显著性差异水平以P&